abc-elisa定量测定红细胞趋化因子受体及其意义

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1、ABC-ELISA定量测定红细胞趋化因子受体及其意义作者：张乐之，卢晓丹，龚燕芳，郭峰【摘要】目的建立ABC-ELISA定量测定红细胞趋化因子受体(ECKR)的方法并探讨其临床意义。方法分离一定数量红细胞与IL-8结合，离心后取上清液用ABC-ELISA法检测IL-8含量，通过公式计算红细胞趋化因子受体结合活性；对该法检测IL-8的灵敏度、精密度、准确度进行了探讨，并对31例正常人，25例恶性肿瘤患者和33例银屑病患者的ECKR进行了测定。结果该法检测IL-8的灵敏度为15.6pg/ml。精密度批内平均CV4.69%；批间平均CV9.79%，准确度平均回收率为97%。31例

2、正常人ECKR为(52.96±10.45)%；25例恶性肿瘤ECKR为(46.07±13.33)%；33例银屑病人ECKR为(46.87±10.28)%。经统计，恶性肿瘤患者和银屑病患者ECKR均比正常人ECKR要低(P<0.05)。结论该法是一种简便的定量测定ECKR的新方法，对研究红细胞免疫、趋化因子及其受体在疾病防治和发病机理中的作用有一定价值。【关键词】红细胞趋化因子受体；链霉亲和素生物素-ELISA；白介素-8；红细胞免疫9【Abstract】ObjectiveTodevelopaquantitativeABC-ELISAandtoinvestigateth

3、eclinicalsignificanceforhumanerythrocytechemokinereceptor.MethodsIsolatederythrocytesboundtoIL-8.AftercentrifugeIL-8levelsweremeasuredwithABC-ELISAinthesupernatant.Activityoferythrocytechemokinereceptorwerecalculatedbyformula.ResultsTheminimumdetectablelimitwas15.6pg/ml.Precision：Themeanco

4、efficientsofvariationwere4.69%forinter-assayand9.79%forintra-assay，respectively.Accuracy：Themeanrecoveryratewas97%.In31normaladults，theECKRbindingactivity(±s%)was52.96±10.45.In25tumors，33psoriasises，itwas46.07±13.33，46.87±10.28respectively.TheECKRbindingactivityofthetumorsandthepsoriasises

5、decreasedsignificantly(P<0.05)compareswithnormalcontrolgroupbystatistics.ConclusionAquantitativeABC-ELISAforerythrocytechemokinereceptorisasimpleandnewmethod.ThedetectionoftheECKRbindingactivityhasavaluetostudyRBCimmune，chemokineanditsreceptorinpreventing，treatingandthepathogenesisofthe

6、disease.【Keywords】erythrocytechemokinereceptor；ABC-ELISA；interleukin-8；erythrocyteimmune91982年郭峰［1］在国内首先建立了测定红细胞免疫粘附功能的方法，并证明红细胞的免疫粘附功能主要是通过CR1实现的。该法简便易行，沿用至今。二十年来，红细胞免疫研究逐渐深入，已发现红细胞表达多种天然免疫受体和物质，如CR1、CR3、CD44、CD58、CD59、DAF、SOD酶和趋化因子受体(CKR)等，其中每个红细胞上的红细胞趋化因子受体(ECKR)表达的数量比CR1要多［2］，但对ECKR的作用

7、却知之甚少。因此我们建立了ABC-ELISA定量测定ECKR方法并初步应用于临床，现报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1主要实验试剂和仪器人重组白介素-8(IL-8)纯品(北京医科大学分子免疫室产品)；人链霉亲和素生物素-ELISA(ABC-ELISA)试剂盒(法国Diaclone公司产品)；微晶纤维素(上海赵屯药厂产品)；α-纤维素(浙江湖州食品化工联合公司产品)；淋巴细胞分离液(上海试剂二厂产品)；酶标仪(芬兰Labsystems公司制造)。1.1.2实验对象9采自本院体检健康者和门诊或住院患者。正常对照