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时间:2018-08-01
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1、Klotho蛋白在高血压发病中的作用作者:何亚军,苏显明,王新阳【摘要】目的探讨klotho蛋白在高血压发病中的作用。方法收集我院2009年3月~2009年6月间住院的104例高血压和61例非高血压者血样本,采用ELISA方法检测klotho蛋白、硝基还原酶法检测一氧化氮(NO)。结果高血压组klotho蛋白吸光度和NO水平低于非高血压组(P<0.01);klotho蛋白吸光度与NO、年龄存在相关性。结论Klotho蛋白是一个与衰老相关的蛋白,可能通过一氧化氮机制参与高血压发病。【关键词】Klotho蛋白;一氧化氮;老年;高血压ABSTRACT:Obj
2、ectiveToinvestigatetheroleofklothoproteininthepathogenesisofhypertension.MethodsWecollectedbloodsamplesof104patientswithhypertensionand61peoplewithouthypertensionadmittedtoourhospitalbetweenMarchandJune2009.Klothoproteinandnitricoxide(NO)inbloodserumweredetectedbyELISAandnitroredu
3、ctasemethods.ResultsKlothoproteinabsorbanceandNOwerelowerinhypertensiongroupthaninnonhypertensiongroup(P<0.01).KlothoproteinabsorbancewascorrelatedwithNO9andage.ConclusionKlothoproteinisaproteinassociatedwithaging.Klothoproteinmaybeinvolvedinthepathogenesisofhypertensionthrough
4、nitricoxidemechanism. KEYWORDS:klothoprotein;nitricoxide;aging;hypertension 高血压系人类常见病、多发病。高血压的发病是由多基因变异、环境和个体差异等诸多因素共同作用导致机体功能紊乱引起,其中多基因变异引起人们越来越多的关注。Klotho是最近研究发现的一种新基因,其主要在肾脏和脑表达。表达的蛋白在人和小鼠中均有膜结合型和分泌型两种形式,其中分泌型的表达量明显高于膜结合型。研究发现,klotho基因敲除鼠出生后4周龄左右出现动脉硬化和异位钙化,并随增龄而加重[2]。将klotho基
5、因杂合子鼠和野生型鼠同时放在高压环境下20h后,发现杂合子鼠主动脉对乙酞胆碱松弛反应的有效剂量增高,小动脉对乙酞胆碱所引起的舒血管反应明显减弱[23]。一氧化氮(nitrodioxide,NO)是血管内皮细胞分泌的重要舒血管因子。研究表明,NO与高血压之间存在着密切关系[4]。我们推测,klotho可能与高血压发病有某种关联,并检测了高血压人群与非高血压人群血清klotho蛋白和NO水平的变化,以探讨klotho在高血压发病中的作用。9 1资料与方法 1.1一般资料本课题研究对象为2009年3月~2009年6月在西安交通大学医学院第一附属医院住院的老年
6、心血管病患者165例,入院时均经过询问病史、体格检查、X线检查、心电图、超声心动图以及相关实验室检查等。排除急慢性肝肾疾病、肿瘤、脑血管病、周围血管性疾病等,按有无高血压分为2组:高血压组104例,非高血压组61例。两组临床情况见表1。高血压诊断标准:采用水银血压计测量患者右测上臂,不同时间3次血压均高于140/90mmHg(1mmHg=0.133kPa)。表1两组一般情况比较 1.2方法收取所有患者血液3~5mL后于2000r/min离心10min,吸取上清液于-80℃冰箱保存待测。①Klotho蛋白的检测:采用ELISA法。将患者血清按1∶10稀释后加
7、入96孔板中,每孔0.1mL,4℃过夜。次日弃去孔内液体,用含有吐温20PBS洗涤液清洗5次,加入英国abcom公司提供的抗klotho抗体(ab76356),klotho抗体用含牛血清白蛋白PBS稀释,稀释比例1/12500,稀释后加入96孔板中,每孔0.1mL置入37℃温箱孵育1h,后弃去液体,用含有吐温20的PBS洗涤液清洗5次,加入辣根酶标记的山羊抗兔抗体,用含牛血清白蛋白PBS稀释,稀释比例1/2000,稀释后加入96孔板中,每孔0.1mL置入37℃温箱孵育1h,后弃去液体,用含有吐温20的PBS洗涤液清洗5次,加入新鲜配制成的TBM显色剂每
8、孔0.1mL置入37℃9温箱孵育30min,终止液终
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