多巴胺d3受体基因敲除对小鼠基础痛阈的调制作用

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1、多巴胺D3受体基因敲除对小鼠基础痛阈的调制作用作者：李林　赖江华　陈利萍　朱俊艳　陈腾【摘要】　　目的研究多巴胺D3受体对小鼠基础痛阈的调制作用，为进一步探讨D3受体在痛觉调制作用中的分子机制奠定基础。方法对实验小鼠进行适应性预处理后，用甩尾仪测定D3受体基因敲除小鼠(D3-/-)及具有相同遗传背景的野生型(C57BL/6J)小鼠的基础痛阈。结果D3受体基因敲除小鼠的基础痛阈高于野生型C57BL/6J小鼠，统计学检验显示两组间有显著性差异(P<0.05)。结论多巴胺D3受体可能参与痛觉的调制过程，对脊髓伤害性反射具有紧张性下调易化效应。对进一步在分子水平探讨多巴胺对痛觉调

2、制作用机制奠定了基础。【关键词】多巴胺D3受体；基础痛阈；基因敲除小鼠　　脑内多巴胺(dopamine,DA)系统是参与调节人类躯体运动、精神活动以及精神依赖的重要递质[1]，随着中枢定位分析的逐渐精确以及特异性的DA受体(dopaminereceptor,8DR)亚型工具药的应用,中枢DA系统在痛觉调制中的作用越来越受到重视。由于既往关于DR对痛觉调制作用的研究多是通过给予多巴胺受体激动剂或拮抗剂来进行的，存在特异性及靶向性不强等不足，因此各家报道的研究结果很不一致[2]。而多巴胺D3受体基因敲除(dopamine3receptorknockout,D3RKO)小鼠具有基因

3、定向敲除后特异性高等优势，因此为深入研究DA受体在痛觉调制过程中的作用提供了一条新途径。本实验通过对多巴胺D3受体基因敲除小鼠及野生型(C57BL/6J)小鼠进行基础痛阈测定来揭示多巴胺D3受体在痛觉调制过程中的作用。　　1材料与方法　　1.1实验动物及分组D3RKO小鼠(D3-/-)(由美国芝加哥大学徐明教授惠赠)以及具有相似遗传背景的野生型(wildtype,WT)C57BL/6J小鼠(由西安交通大学实验动物中心提供)各8只，雌雄各半，体重20-25g。动物饲养在SPF(specificpathogenfree)级动物房，恒温21℃。各组小鼠在层流架中分笼饲养，24h周期

4、明暗交替照明,动物自由进食及饮水。　　1.2实验仪器甩尾痛觉测试仪(33TailFlickAnalgesiaMeter,ITC,USA)。　　1.3实验动物预处理在开始实验前2d对实验动物进行预处理。每天在同一时间和同一环境，由实验操作人员佩戴在实验小鼠鼠笼垫料中放置过的棉线手套在甩尾仪上安抚小鼠直至其保持安静状态，使其适应实验环境及操作过程。8　　1.4基础痛阈测定用辐射热照射鼠尾，测定甩尾潜伏期(s)，连续3d，每天测试3次，每次间隔30s。辐射热照射强度为仪器65%强度，照射部位为小鼠尾部下2/3处，使小鼠的甩尾潜伏期在1.5-3s间。　　1.5统计学处理采用SPSS11

5、.5软件对两实验组数据进行重复测量方差分析，P<0.05表示有显著性差异。　　2结果　　对资料进行球检验得近似χ2值为14.632，自由度为2，对应P值0.001，故进行GreenhouseGeisser多元重复测量方差分析，结果见表1、2。　　表1D3RKO小鼠和C57BL/6J小鼠基础痛阈测定结果（略）　　Table1BaselinepainthresholdofD3RKOmiceandC57BL/6Jmice　　**P<0.01and*P<0.05vs.C57BL/6Jgrouponthesameday8　　表2各项统计学参数（略）　　Table2St

6、atisticalparameters　　3讨论　　多巴胺受体包括D1、D2、D3、D4、D5五种亚型。由于D1和D5受体分子同源性超过80%及与兴奋性G蛋白(Gs)耦联等共同特性,在药理学特征上与传统的D1亚型受体相似，因此统称为D1样受体(D1likereceptors)。D2、D3和D4受体分子同源性约为45%，受体基因有4-6个内含子，无棕榈酸酯化作用，均与抑制性G蛋白(Gi)相耦联，在药理学特征上与传统的D2亚型受体相似，故统称为D2样受体(D2likereceptors)[3]。既往对多巴胺受体功能的研究主要是通过给予拮抗剂或激动剂的方法进行。对于D3受体，常用

7、的配体有四氢萘满类、LY171555、PD128907、(+)S14297等，是D3受体激动剂或拮抗剂。由于D3受体与D2、D4受体结构上高度同源，空间分布上部分重叠使得这些配体都只是部分性的激动剂或拮抗剂，并不能起到D3受体专一性拮抗或激动，因此就使得在此基础上研究结果的可信度受到一定影响。8　　本实验所用的D3RKO小鼠是以野生型C57BL/6J小鼠为基础，通过由PGK(phosphoglyceratekinase)启动子调控的neo(neomycinresistance)基因替代多巴胺