云南怒族线粒体dna d环高变区ⅱ遗传多态性研究

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1、云南怒族线粒体DNAD环高变区Ⅱ遗传多态性研究作者：高树辉，桂宏胜，李生斌【摘要】　　目的观察中国云南怒族群体线粒体DNAD环高变区Ⅱ(HVRⅡ)单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)的群体遗传特点，为法医学鉴定提供线粒体DNA序列多态性的基础数据。方法应用ABI3730型遗传分析仪，PCR产物直接测序法，对65名中国云南怒族无关个体血液中利用chelex100法提取的线粒体DNAD环高变区Ⅱ进行序列分析。结果在线粒体DNA高变区Ⅱ(HVRⅡ)73～366之间与An

2、derson序列比较，云南怒族65名无关个体共发现有59个单倍型，401个突变点。SNP基因差异度为0.9957，核苷酸多态性为0.1174。结论云南怒族线粒体DNAD环区HVRⅡSNP具有高度多态性，是对怒族群体的个体识别、亲权鉴定以及民族起源分子研究有用的遗传标记。【关键词】怒族群体HVRⅡ线粒体单核苷酸多态性个体识别　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethemitochondrialDNADloopregionHVRⅡsinglenucleotidepolymorphism(

3、SNP)ofNuethnicpopulationfromYunnanProvinceofChinaandtoprovidebasicdatabaseofmtDNAsequencepolymorphismforforensic8identificationpurpose.MethodsGenomicDNAfromthewholebloodof65unrelatedindividualsfromNuethnicpopulationlivinginYunnanProvinceofChinawasextractedbyst

4、andardchelex100.ThesequencepolymorphismwasanalyzedbyPCRbasedassaywithABI3730Analyzertodetectthenumberofrelativelycommonpointmutations.ResultsWecomparedthemtDNAHVRⅡ73～366withtheAndersonsequence;59SNPlociwereobservedamongthemwith401pointmutationsidentifiedinmt

5、DNAof65individualNuethnicpopulation.Thegeneticdiversitywasestimatedtobe0.9957,andtherandommatchprobabilitywascalculatedtobe0.1174.ConclusionTheresultsuggeststhatmtDNAHVRⅡSNPdatabaseofNuethnicpopulationcanbeanusefultoolforforensicindividualidentification,patern

6、itytestandnationaloriginresearch.　　KEYWORDS:Nuethnicpopulation;HVRⅡ;mitochondrialsinglenucleotidepolymorphism;individualidentification　　人类线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)是一个双链环状的DNA分子，共含有16569个碱基[1]，是唯一的细胞核外DNA。线粒体DNA有一个非编码区，称为控制区(controlregion)，也称D环区(Dloopreg

7、ion)。D8环区大约有1100bp的碱基，其中包括两个高变区(HVRⅠ和HVRⅡ)，高变区Ⅰ的范围大约在16024～16365间，高变区Ⅱ的范围约在73～340间。在两个高变区间，线粒体DNA存在着高度序列多态性，作为遗传标记已被广泛应用于法医学个体识别和亲权鉴定。本研究以云南怒族群体线粒体DNAD环区HVRⅡ为研究对象，观察怒族线粒体DNA单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)的群体遗传特点，为法医学鉴定提供线粒体DNA序列多态性的基础数据。　　1对象与方法　　1

8、.1样本　　云南怒族65名无血缘关系健康个体静脉血，每份3mL，EDTA抗凝，-70℃保存。　　1.2方法　　1.2.1线粒体DNA提取　　Chelex100法提取DNA。　　1.2.2线粒体DNA扩增与纯化8　　线粒体DNA的扩增：PCR反应体系为30μL，反应混合物中包括以下成分：3′端及5′端引物各6pmol，2×pfu酶PCRMix15μL，10n