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1、毛细管电泳-激光诱导荧光检测大鼠脑组织多巴胺含量蚌埠医学院2007年7月第32卷第4期393[文章编号]1000—2200(2007)04-0393—03?基础医学?毛细管电泳一激光诱导荧光检测大鼠脑组织多巴胺含量刘广印,沈佐君,何晓东,伊茂礼[摘要]目的:采用毛细管电泳一激光诱导荧光法建立检测大鼠脑组织多巴胺含量的方法.方法:低温匀浆大鼠脑组织离心后,取上清用pH11.010mmo~L硼砂缓冲液,在室温下衍生反应10h连接上FITC荧光基团;毛细管电泳分离条件为pH10.3100mmo~L硼酸一
2、Tris缓冲液.结果:在选定的实验条件下,方法检测限(S/N=3)达2.1nmo~L水平,批内相对标准差(RSD)为3.4%,回收率达96.05%,在l0～～10"moL/L范围内呈良好线性关系.结论:应用毛细管电泳一激光诱导荧光法可检测鼠脑组织多巴胺含量.[关键词]帕金森病;多巴胺;电泳,毛细管;激光诱导荧光;大鼠[中国图书资料分类法分类号]R742.5;R971.93[文献标识码]AtDeterminationofdopamineinthebraintissueofratsbyusingcap
3、illaryelectrophoresiswithlaser-inducedfluorescencemethodLIUGuang—yin,SHENZuo-jun,HEXiao?dong,YIMao—li(AnhuiProvincialCenterforClinicalLaboratoO,,AnhuiProvincialHospital,AnhuiMedicalUnversity,Hefei230001,China)[Abstract]Objective:Toestablishamethodofde
4、terminingthedopamineinthebraintissueofratsbyusingcapillaryelectrophoresiswithlaser—inducedfluorescence.Methods:Thehomogenateoftherats'braintissuewascentrifugatedinlowtemperatureandthesupernatantwasreactedinpH11.010mmol/Lboraxbuffersolution.Thereaction
5、ofderivatizationtimewas10hoursunderalkaline(10mmo~LNa2B4O7pH11.0);mobileconditionofcapillaryelectrophoreticseparationwasamixtureof100mmol/LBoricacid—Tris.Results:Detectionlimitsofthemethodweredeterminedtobelowerthan2.1nmo~LandtheRSDvalueswere3.4%:ther
6、ecoverieswereabove95.6%.Thelinearitywasfrom10一to10-'moL/IJ.Conclusions:Themethodofdetectingdopamineinthebrainofratsisconvenientbyusingcapillaryelectrophoresiswithlaser—inducedfluorescence.[Keywords]Parkinsondiasease;dopamine;electrophoresis,capillary;
7、laser—inducedfluorescence;rats多巴胺(dopamine,DA)属儿茶酚胺类,为单胺类神经递质.DA主要集中在锥体外系,定量分析其含量对于神经系统疾病尤其是帕金森病的临床研究有重要的意义¨.单胺类神经递质的测定方法主要有高效液相色谱法(HPLC),电化学分析法和毛细管电泳法.HPLC是研究细胞外液中某些递质类氨基酸的主要手段,但因进样量较大,HPLC无法与微透析取样技术(1～2min)联用以实现神经递质在某些重要生理及病理过程中的动态监测.此外,荧光检测的灵敏度较低,无
8、法满足细胞外液中某些超痕量神经递质检测的需求;电化学检测虽然具有较高的灵敏度,但重现性差及大量其它有电化学响应物质的干扰是影响其应用的主要问题.毛细管电泳一激光诱导荧光(CE.LIF)方法具有进样量小,高效和灵敏度高的特点,与微透析技术结合可对痕[收稿日期]2006-08-29[基金项目]安徽省自然科学基金资助项目(050430902)[作者单位]安徽省立医院临床检验中心,安徽合肥230001[作者简介]刘广印(1965一),男,硕士,主要从事毛细管电泳一激光诱导荧光的研究(现工作
