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1、不孕妇女宫颈分泌物解脲支原体检测及临床意义[关键词]不孕症；宫颈分泌物；解脲支原体近年来，支原体感染与不孕症的关系越来越受到人们的重视，其中主要是解脲支原体（ureaplasmaurealyticum,UU）。本研究应用荧光定量PCR的方法(FQ-PCR)对320例不孕妇女进行宫颈分泌物解脲支原体DNA检测，了解解脲支原体感染与不孕症的关系，尤其与输卵管因素不孕的关系。现将结果分析报告如下。 1材料与方法 1.1一般资料 2004年5月～2005年5月到我院生殖医学中心拟接受体外受精－胚胎移植助
2、孕的不孕妇女共320例，其中原发性不孕患者136例，继发性不孕患者184例；输卵管因素不孕患者201例，非输卵管性不孕患者119例；年龄23～41岁，不孕年限2～20年。同时对60例有过正常妊娠分娩史的妇女进行检测，作为正常对照组。 1.2仪器与试剂6 美国ABIPRISM7000SequenceDetectionSystem荧光定量PCR仪。解脲支原体DNA荧光定量PCR试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供。 1.3方法 1.3.1标本采集：采样时用未蘸消毒液的窥阴器扩张阴道后，先用无菌
3、生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈管内，停留5s后旋转棉拭子采集宫颈分泌物，将采集宫颈分泌物的棉拭子放入无菌试管中送检。 1.3.2解脲支原体DNA检测：将1ml生理盐水加入标本试管中，充分震荡摇匀，吸取液体转至1.5ml离心管中，12000rpm离心5min。沉淀加生理盐水1ml打匀，15000rpm离心5min，再重复洗涤一次。沉淀直接加50μlDNA提取液充分混匀，10000rpm离心5min，取上清液2μl做PCR反应。取单管单人份PCR反应管若干管，直接加入处理后样品2μ
4、l（同时设置阴阳性质控标准品），6000rpm离心10s。将各反应管放入PCR仪，进行扩增。 1.4结果判断6 样本扩增曲线与阈值线交叉点的循环数（Ct值）<30，判断实验结果为阳性。 1.5统计学处理 采用χ2检验。 2结果 320例不孕妇女（不孕组）宫颈分泌物解脲支原体DNA检测阳性者145例，阳性率45.31%，60例正常对照组阳性者17例，阳性率28.33%，两组比较，差异有显著性(P<0.05)。201例输卵管因素不孕患者宫颈分泌物解脲支原体DNA检测阳性率为49.8
5、%（100/201），119例非输卵管因素性不孕患者宫颈分泌物解脲支原体DNA检测阳性率为37.8%（45/119），两组比较，差异有显著性(P<0.05)。136例原发性不孕患者宫颈分泌物解脲支原体DNA检测阳性率为45.59%（62/136），184例继发性不孕患者宫颈分泌物解脲支原体DNA检测阳性率为45.11%（83/184），两组比较无显著性差异(P>0.05)。 3讨论6 支原体是一群大小介于细菌和病毒之间的原核生物,种类繁多,其中解脲支原体(UU)是引起人类泌尿生殖道感染
6、的病原体之一。近年来的研究表明生殖道支原体感染与不孕不育有关[1,2]。女性不孕，尤其输卵管因素不孕与支原体感染关系密切[3]。在本资料中320例不孕妇女（不孕组）宫颈分泌物UU-DNA检出率为45.31%，明显高于正常对照组（28.33%），且输卵管因素不孕患者宫颈分泌物UU-DNA检出率（49.8%）高于非输卵管因素性不孕患者（37.8%），说明不孕妇女支原体感染率高，输卵管因素不孕与UU感染有关，与文献报道一致[3，4]。UU感染引起不孕的机制：一方面，UU可粘附于生殖道粘膜细胞的表面，损害细胞
7、，引起女性宫颈炎、子宫内膜炎和输卵管炎，破坏输卵管粘膜上皮，导致输卵管结构和功能受损而致不孕；另一方面,UU分解尿素产生的ＮＨ4破坏作为天然屏障的弱酸性环境,促使其他病原微生物易于定植、感染而不利于精子成活。最近，邓超干等[5]报道UU感染与抗精子抗体(ＡＳＡｂ)的产生有关。当ＵＵ感染时,女性生殖道受损,使生殖道内的环境发生改变、生理屏障受到破坏,女性体内独特型抗体和抗独特型抗体的网络功能紊乱,不利于精子成活,死亡精子和抗原释放,使免疫系统受损的女性对丈夫精子过敏产生ＡＳＡｂ，导致免疫性不孕。6 由
8、于解脲支原体感染后自觉症状较轻,甚至无自觉症状表现,易被医生和患者所忽视，以致感染反复迁延而呈现进行性和不可逆的病理变化；解脲支原体感染不仅引起不孕，还可引起流产、异位妊娠等不良妊娠结局[6]。这就提醒我们对不孕症患者尤其是输卵管梗阻因素所致的不孕患者,应把解脲支原体检测做为常规检测项目，及早进行检测和治疗,以防止解脲支原体感染迁延引起输卵管完全梗阻和严重盆腔粘连等不可逆变化。 体外受精－胚胎移植是目前最主要的辅助生殖技术，随着该技术的普及,越来越多的
