nt4-ant-shepherdin［79-87］融合基因重组载体的构建

《nt4-ant-shepherdin［79-87］融合基因重组载体的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、NT4-Ant-Shepherdin［79-87］融合基因重组载体的构建作者：汤小江，平宝华，潘承恩，杨广笑，王全颖【摘要】目的设计构建携带NT4-Ant-Shepherdin［79-87］的cDNA融合基因的重组载体，为针对Survivin的靶向治疗奠定基础。方法应用非对称引物/模板法、PCR技术制备NT4-Ant-Shepherdin［79-87］cDNA片断，连接于pGEM-T-Easy载体，经克隆测序、酶切后与PBV220/NT4质粒连接；转化感受态细胞E.coliDH5α，亚克隆获得NT4-Ant-Shepherdin［79-87］融合基因。结果克隆出A

2、nt-Shepherdin［79-87］基因，经酶切及测序证实结果正确；连接PBV220/NT4，经克隆、酶切，琼脂糖凝胶电泳证实获得321bp的NT4-Ant-Shepherdin［79-87］目的基因片断。结论通过分子生物学技术成功构建了携带NT4-Ant-Shepherdin［79-87］融合基因的重组载体，为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础【关键词】Survivin；Ant；神经营养因子4(NT4)；融合基因；载体　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatesurvivinasananticancerthera

3、peutictargetbyuseofshepherdin［79-87］,anovelpeptidecarryingthesurvivinsequencefromLys-79through11Leu-87,weconstructedanrecombinantvectorcontainingfusiongeneNT4-Ant-Shepherdin［79-87］.MethodsThegeneofAnt-Shepherdin［79-87］wasobtainedbyPCRandT-vectormethod.Afterclonedanddigestedwithrestric

4、tedenzyme,Ant-shepherdin［79-87］wasinsertedinPBV220/NT4vector.Therecombinantvectorwastransformedintothecompetentcell,E.coliDH5α.ThefusiongeneofNT4-Ant-Shepherdin［79-87］wasidentifiedbyagarosegelelectrophoresis(AGE).ResultsDNAsequencingresultsverifiedthatthesequenceofAnt-Shepherdin［79-87

5、］wasconsistentwithwhatwehaddesigned.AftertransformedE.coliDH5α,afragmentof321bpwasconfirmed.ConclusionTherecombinantvectorcontainingfusiongeneNT4-Ant-Shepherdin［79-87］wassuccessfullyconstructedinthisexperimentbymolecularbiologytechniques,whichprovidesthebasisoffurtherresearchofsurvivi

6、nforcancergenetherapy.　　KEYWORDS:survivin;Ant;NT4;fusiongene;vector　　Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitionofapoptosisprotein,11IAP)家族的重要成员。1997年，耶鲁大学的Ambrosini等［1］在人类基因组文库中用效应细胞蛋白酶受体-1(EPR-1)的cDNA筛选克隆出来一个新基因，即Survivin，也称为凋亡抑制子4(API4)。Survivin基因位于人类17号染色体的q25区，全长14.7kb。编码含142个氨基酸、分子质量为16.5ku的胞质蛋白

7、。研究表明，Survivin在大多数终末组织不表达，而在大多数实体瘤及血液系统肿瘤中呈现高表达［2］，具有凋亡抑制、参与细胞增殖及调节肿瘤血管生成等重要作用［3-5］。由于Survivin作为一个癌基因，交叉作用于多个细胞内网络系统，因而近年来针对Survivin进行了广泛的肿瘤靶向治疗研究，包括反义寡核苷酸、显负性突变体、核酶、小干扰RNA(SiRNA)、疫苗及免疫治疗、小分子拮抗物等［6］。最近的研究发现，肿瘤细胞Survivin的高表达同细胞内热休克蛋白90(Hsp90)高表达相关，升高的Survivin与Hsp90结合，保护Survivin不被泛素-蛋白酶

8、体降解［7