dim联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用

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1、DIM联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用作者：匡幼林翁小东陈志远刘修恒祝恒成江波涛【摘要】　　目的探讨3,3二吲哚基甲烷（DIM）联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对前列腺癌细胞的抑制作用。方法CCK8法测定DIM、TRAIL及DIM联合TRAIL作用于PC3细胞后的细胞生存率，同时用流式细胞术测定细胞凋亡率，Western印迹检测caspase3表达水平的变化。结果各给药组与对照组比较均能不同程度抑制PC3细胞增殖并诱导其凋亡，且caspase3表达上调；DIM与TRAIL联用明显增强诱导凋亡作用。结论DIM与TRAIL

2、联用均可明显增强PC3细胞抑制效果和诱导凋亡作用，其凋亡作用机制可能与其上调caspase3表达有关。【关键词】前列腺癌；肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体；3,3二吲哚基甲烷；细胞凋亡【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinhibitoryeffectof3,3diindolylmethane(DIM)incombinationwithTNFrelatedapoptosisinducingligand(TRAIL)ontheprostatecancercells.MethodsCCK8methodswasusedfordet

3、ectingthesurvivalrateofPC3cellstreatedwithDIM,TRAIL,orDIM10TRAIL.TheapoptosisrateofPC3cellswastestedbyflowcytometry(FCM).Theexpressionofcaspase3wasmeasuredbyWesternblot.ResultsComparedwiththatofcontrolgroup,theproliferationofPC3cellswasinhibitedandtheapoptosiswasinduceddifferentlyi

4、nalltreatmentgroups,andtheexpressionofcaspase3wasupregulated.ThecombineduseofDIMTRAILinducedapoptosisofPC3cells.ConclusionsCombinationuseofDIMandTRAILcouldobviouslyenhancetheinhibitoryeffectsandapoptosisrateonPC3cells.Thepossiblemechanismmaybetheupregulationofexpressionofcaspase3

5、.【Keywords】Prostatecancer;TNFrelatedapoptosisinducingligand;3,3diindolylmethane;Apoptosis　　前列腺癌是一种发生于老年男性的常见肿瘤。肿瘤坏死因子（TNF）相关凋亡诱导配体（tumornecrosisfactorrelatedapoptosisinducingligand，TRAIL）可诱导包括前列腺癌细胞在内的多种肿瘤细胞凋亡，但研究报道至少50%的肿瘤细胞对TRAIL耐药〔1〕。3，3二吲哚基甲烷（3，3diindolylmethane，DIM）能消除自由基，激活

6、凋亡信号通路，具有较强的抗氧化作用和促进多种肿瘤细胞凋亡作用〔2〕。因此，本文探索DIM协同TRAIL对前列腺癌细胞的作用。10　　1材料与方法　　1.1材料　　人前列腺癌细胞(PC3细胞)购自中国科学院。DIM、人重组TRAIL蛋白均购自美国Sigma公司；胎牛血清、RPMI1640培养液购自杭州四季青公司，胆囊收缩素/缩胆囊素8(CCK8)试剂盒购自日本同仁化学研究所，膜联蛋白V（AnnexinV）凋亡试剂盒购自联科生物科技有限公司，兔抗人半脱氨酸蛋白酶（caspase）3多抗购自SantaCruz公司，羊抗兔IgG二抗购自博士德公司。　　1.2方法　　1

7、.2.1细胞培养　　人前列腺癌细胞PC3在10%胎牛血清的RPMI1640培养液，37℃，5%CO2的培养箱中培养。　　1.2.2CCK8法测定PC3细胞增殖活性　　取对数期生长的PC3细胞2×10104/孔接种于96孔圆底培养板，每孔添加100μl培养基，培养18h后，分别加入化疗药物DIM（60μl/L）、TRAIL（2.5ng/ml）及DIM（60μl/L）+TRAIL（2.5ng/ml）继续培养，每组设3个复孔，并设阴性对照组（不加化疗药物）。在培养24、48、72h各时间点，分别加入10μl/孔CCK8溶液，再经2h培养后，酶标仪