ape1在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义

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1、APE1在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义作者：张颖，王东，辛晓燕，王建，向德兵，杨宇馨【摘要】目的：探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶（APE1）基因在卵巢上皮性癌中表达的相关性及其意义.方法：应用免疫组织化学检测10例正常卵巢、20例卵巢良性肿瘤、15例卵巢交界性肿瘤和120例卵巢上皮性癌组织中APE1的表达，并分析其与临床病理因素之间的关系.结果：卵巢癌组织中APE1呈胞核表达、单纯胞质表达或核质共同表达，胞质异位表达率（57.5%）明显高于正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤.APE1胞质表达与卵巢癌病理类型、肿瘤分化程度和FIGO分期有关（P<0.05）.APE1

2、胞核表达的化疗有效率为77.4%，高于APE1胞质异位表达53.8%，APE1胞核表达的卵巢癌患者预后要优于APE1胞质异位表达的卵巢癌患者（P<0.05）.结论：APE1表达在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用，APE1的亚细胞定位对卵巢癌化疗的疗效和预后有一定临床应用前景.【关键词】卵巢肿瘤；脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶；DNA损伤；免疫组织化学0引言9卵巢癌是较常见的女性生殖系统肿瘤，恶性程度高，近年来其发生率在国内外呈上升趋势.寻找敏感性高、特异性强的肿瘤标记物是卵巢癌诊治中急待解决的问题.脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidini

3、cendonuclase，APE1)，是DNA碱基切除修复途径的关键酶，主要负责DNA损伤中最常见的脱嘌呤/脱嘧啶(apurinic/apyrimidinic，AP)位点［1］.有研究［2-3］报道，APE1在多种肿瘤组织中高表达，但APE1在卵巢癌组织中的表达还少见报道.我们采用免疫组织化学技术检测原发性卵巢癌手术标本中APE1的表达特点，旨在从临床病理角度探讨APE1在卵巢癌发生发展中的作用.1对象和方法1.1对象选择第四军医大学西京医院和第三军医大学大坪医院199801/200701经手术确诊的卵巢上皮癌初治患者120例，年龄19～81（平均47.2）岁

4、，其中浆液性囊腺癌54例，粘液性囊腺癌35例，子宫内膜样癌7例，未分化腺癌24例.细胞学分级：高分化癌19例，中分化癌68例，低分化癌33例.按国际妇产科联盟（FIGO)2003年手术病理分期标准进行分级，其中I期23例，Ⅱ期11例，Ⅲ期73例，Ⅳ期13例.9另取良性卵巢肿瘤20（浆液性囊腺瘤10，粘液性囊腺瘤10）例，年龄23～67（平均43.6）岁，交界性肿瘤15例，21~62（平均38.7）岁和正常卵巢组织10例，年龄38～63（平均46.4）岁作为对照.所有标本均经40g/L甲醛固定，常规石蜡包埋，HE染色后再次复核诊断.浓缩型APE1兔抗人mAb，工作浓

5、度为1∶5000（美国NovusBiologicals公司）；SP免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术公司）；ImageproPlus5.1图像分析系统（美国MediaCyberneticsInc公司）.1.2方法1.2.1免疫组织化学染色采用SP二步法进行检测.选取组织蜡块进行连续切片，片厚4μm，60～80℃烤片20min，常规脱蜡，乙醇梯度水化，30mL/LH2O2甲醇封闭内源性过氧化物酶活性，室温10min，PBS(pH7.2～7.6)洗3次，每次5min.将切片浸入0.01mol/L柠檬酸缓冲液(pH6.0)，微波炉加热至沸腾后断电

6、，间隔5min后重复1次，PBS洗3次，每次5min.滴加5mL/L正常山羊血清封闭10min，滴加1∶5000稀释的APE1一抗，湿盒内4℃冰箱保存过夜，滴加PowerVisionTM复合物50μL，37℃孵育30min，DAB显色，苏木素复染.采用磷酸盐缓冲液代替一抗作为免疫染色阴性对照，采用已知APE阳性的骨肉瘤标本作为阳性对照.1.2.2结果判定光学显微镜下观察，免疫阳性信号为棕黄色细小颗粒.每张切片随机选取5个具有代表性的视野（×400倍），用Imagepro9Plus5.1图像分析系统自动选取阳性区域并计算积分吸光度值，评价APE1蛋白表达水平.将出

7、现APE1单纯胞质表达与核质共表达统称为胞质异位表达.1.2.3疗效评价将120例卵巢癌患者中满足下列条件的病例纳入评价对象：①卵巢癌初治患者；②术后给予以铂类为基础的规范化疗，不少于6个疗程（3wk为1个疗程）；③术后随访3a.根据体检、影像学检查（盆腔B超及必要时的全身CT和PET检查），CA125检查的结果进行客观近期疗效评价，按WHO实体瘤疗效评价标准分为：临床完全缓解，部分缓解，病灶稳定和疾病进展.疾病进展评定标准为：①对于可测量病灶，按照新的实体瘤评价标准即病灶最大径线总和增加20%以上或出现新病灶［4］；②对于不可测量病灶，CA125≥最低值的2倍［

8、5］.PR