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时间:2018-08-01
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1、1,6二磷酸果糖预处理对家兔急性肾缺血再灌注损伤的保护作用作者:刘行海买文丽刘红郑倩敬华娥易志刚【摘要】目的:观察1,6二磷酸果糖(FDP)预处理对急性肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法:新西兰大白兔27只,随机均分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)、1,6二磷酸果糖预处理组(F组)。采用左肾切除右肾动静脉夹闭60min再灌注180min致肾损伤的模型,术前连续4d给予FDP。缺血再灌注180min后分别检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾组织丙二醛(MDA)水平及超氧化物岐化酶(SOD)活性,观察肾组织的病理变化及肾小管计分,并对
2、3组进行比较。结果:与S组比较,I组的Scr、BUN、MDA水平明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.01)。F组的Scr、BUN、MDA水平均较I组明显降低(P<0.01或P<0.05),而SOD活性明显增强(P<0.01)。F组肾组织病理变化轻于I组。结论:FDP预处理对兔急性肾缺血再灌注损伤具有保护作用,该保护作用的机制可能与增强SOD活性,清除过多的氧自由基,减少MDA的生成有关。【关键词】1,6二磷酸果糖;预处理;肾脏;缺血再灌注损伤7肾缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion,I
3、/R)损伤导致的急性肾功能衰竭在临床上具有很高的发病率和死亡率。因此,如何减轻或避免肾缺血再灌注损伤一直是临床和基础实验研究的重点。1,6二磷酸果糖(FDP)作为糖酵解中高能中间代谢产物,近年研究发现其对心脏、脑、小肠等器官的缺血再灌注损伤有较好的防治效果[1-3],但关于FDP在肾I/R损伤方面的研究较少。本实验通过建立兔肾缺血60min再灌注180min致肾I/R损伤模型,探讨FDP对兔急性I/R损伤的保护作用。 1材料和方法 1.1药物和试剂FDP由山东新华制药股份有限公司提供,产品批号:0906030。血尿肌酐、尿素氮、SOD和MDA测定
4、试剂盒由南京建成生物工程有限公司提供产品批号:20091020。 1.2动物分组及术前处理健康雄性新西兰大白兔27只,本院实验动物中心提供,6月龄,体质量2.5±0.28kg,雌雄不拘,随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)和1,6二磷酸果糖预处理组(F组),每组9只,置空调室常规喂养。术前4d每天1次,F组于耳缘静脉缓慢输注1,6二磷酸果糖(用生理盐水稀释成每ml含FDP为50mg,100mg·kg-1)。S组和I组均仅用2ml·kg-1生理盐水。 1.3肾脏缺血再灌注模型的复制1%戊巴比妥钠溶液(3ml·7kg-1,iv),麻醉兔。腹
5、中线切口,去左肾。分离右肾动、静脉并夹闭,60min后恢复灌流,观察肾脏颜色变化,确定血流5min之内恢复,关闭腹腔再灌注180min时取右肾。假手术组开腹后仅行左肾切除,右肾蒂游离。 1.4标本采集及观察指标于实验结束时心脏取血,测定血清尿素氮(BUN)和血清肌酐(Cr)含量。右肾标本用4℃冷生理盐水冲洗去血液,剪下肾下极组织滤纸吸干,随即称取0.5g加4℃生理盐水4.5ml,用玻璃匀浆器制成10%的组织匀浆,采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,以TBA比色法测定MDA含量。同时摘取部分右肾组织置于10%中性甲醛溶液中固定24h后常规石蜡包埋,按病理学
6、常规制片HE染色,光学显微镜观察肾组织病理变化和肾小管评分。根据Jablonski等[4]制定的肾脏近曲小管坏死程度分级标准分为5级:0级为正常;1级为单个细胞的坏死伴核分裂;2级为相邻近曲小管所有细胞的坏死,但周围小管存活;3级为限定于近曲小管远端1/3细胞的坏死并扩展到皮质和髓质交界处;4级近曲小管整段坏死。 1.5统计学分析应用SPSS13.0统计软件进行处理,计量资料以x±s表示,采用方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1肾脏功能的测定与S组比较,I组和F组血清Cr、BUN水平均升高(P<0.05),而F组低
7、于I组(P<0.01),见表1。表1血清中Scr、BUN含量的变化72.2肾组织MDA含量、SOD活性的变化与S组比较,I组和F组再灌注后肾组织SOD活性均降低、MDA含量均升高(P<0.01);而F组SOD、MDA分别高于和低于I组(P<0.05),见表2。 2.3肾组织病理学改变光镜下观察:S组兔肾组织结构基本正常;I组大部分肾小管上皮细胞出现程度较重的肿胀及不同程度坏死,肾间质局部出血水肿及明显炎性细胞浸润;F组仅见部分肾小管上皮细胞轻度肿胀,少量变性与坏死,肾间质局部轻度出血水肿及炎性细胞浸润。F组肾小管计分明显低于I组(P&
8、lt;0.05),见表3。表2肾组织中SOD活性、MDA含量的变化表3肾小管计分
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