1，6二磷酸果糖预处理对家兔急性肾缺血再灌注损伤的保护作用

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1、1，6二磷酸果糖预处理对家兔急性肾缺血再灌注损伤的保护作用作者：刘行海买文丽刘红郑倩敬华娥易志刚【摘要】目的：观察1，6二磷酸果糖(FDP)预处理对急性肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法：新西兰大白兔27只，随机均分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)、1，6二磷酸果糖预处理组(F组)。采用左肾切除右肾动静脉夹闭60min再灌注180min致肾损伤的模型，术前连续4d给予FDP。缺血再灌注180min后分别检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾组织丙二醛(MDA)水平及超氧化物岐化酶(SOD)活性，观察肾组织的病理变化及肾小管计分，并对

2、3组进行比较。结果：与S组比较，I组的Scr、BUN、MDA水平明显升高(P<0.05)，SOD活性明显降低(P<0.01)。F组的Scr、BUN、MDA水平均较I组明显降低(P<0.01或P<0.05)，而SOD活性明显增强(P<0.01)。F组肾组织病理变化轻于I组。结论：FDP预处理对兔急性肾缺血再灌注损伤具有保护作用，该保护作用的机制可能与增强SOD活性，清除过多的氧自由基，减少MDA的生成有关。【关键词】1,6二磷酸果糖;预处理;肾脏;缺血再灌注损伤7肾缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion,I

3、/R)损伤导致的急性肾功能衰竭在临床上具有很高的发病率和死亡率。因此，如何减轻或避免肾缺血再灌注损伤一直是临床和基础实验研究的重点。1,6二磷酸果糖(FDP)作为糖酵解中高能中间代谢产物，近年研究发现其对心脏、脑、小肠等器官的缺血再灌注损伤有较好的防治效果[1-3]，但关于FDP在肾I/R损伤方面的研究较少。本实验通过建立兔肾缺血60min再灌注180min致肾I/R损伤模型，探讨FDP对兔急性I/R损伤的保护作用。　　1材料和方法　　1.1药物和试剂FDP由山东新华制药股份有限公司提供，产品批号：0906030。血尿肌酐、尿素氮、SOD和MDA测定

4、试剂盒由南京建成生物工程有限公司提供产品批号：20091020。　　1.2动物分组及术前处理健康雄性新西兰大白兔27只，本院实验动物中心提供，6月龄，体质量2.5±0.28kg，雌雄不拘，随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)和1,6二磷酸果糖预处理组(F组)，每组9只，置空调室常规喂养。术前4d每天1次，F组于耳缘静脉缓慢输注1，6二磷酸果糖(用生理盐水稀释成每ml含FDP为50mg，100mg·kg-1)。S组和I组均仅用2ml·kg-1生理盐水。　　1.3肾脏缺血再灌注模型的复制1%戊巴比妥钠溶液(3ml·7kg-1，iv)，麻醉兔。腹

5、中线切口，去左肾。分离右肾动、静脉并夹闭，60min后恢复灌流，观察肾脏颜色变化，确定血流5min之内恢复，关闭腹腔再灌注180min时取右肾。假手术组开腹后仅行左肾切除，右肾蒂游离。　　1.4标本采集及观察指标于实验结束时心脏取血，测定血清尿素氮(BUN)和血清肌酐(Cr)含量。右肾标本用4℃冷生理盐水冲洗去血液，剪下肾下极组织滤纸吸干，随即称取0.5g加4℃生理盐水4.5ml，用玻璃匀浆器制成10%的组织匀浆，采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，以TBA比色法测定MDA含量。同时摘取部分右肾组织置于10%中性甲醛溶液中固定24h后常规石蜡包埋，按病理学

6、常规制片HE染色，光学显微镜观察肾组织病理变化和肾小管评分。根据Jablonski等[4]制定的肾脏近曲小管坏死程度分级标准分为5级：0级为正常;1级为单个细胞的坏死伴核分裂;2级为相邻近曲小管所有细胞的坏死，但周围小管存活;3级为限定于近曲小管远端1/3细胞的坏死并扩展到皮质和髓质交界处;4级近曲小管整段坏死。　　1.5统计学分析应用SPSS13.0统计软件进行处理，计量资料以x±s表示，采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1肾脏功能的测定与S组比较，I组和F组血清Cr、BUN水平均升高(P<0.05)，而F组低

7、于I组(P<0.01)，见表1。表1血清中Scr、BUN含量的变化72.2肾组织MDA含量、SOD活性的变化与S组比较,I组和F组再灌注后肾组织SOD活性均降低、MDA含量均升高(P<0.01);而F组SOD、MDA分别高于和低于I组(P<0.05)，见表2。　　2.3肾组织病理学改变光镜下观察：S组兔肾组织结构基本正常;I组大部分肾小管上皮细胞出现程度较重的肿胀及不同程度坏死，肾间质局部出血水肿及明显炎性细胞浸润;F组仅见部分肾小管上皮细胞轻度肿胀，少量变性与坏死，肾间质局部轻度出血水肿及炎性细胞浸润。F组肾小管计分明显低于I组(P&

8、lt;0.05)，见表3。表2肾组织中SOD活性、MDA含量的变化表3肾小管计分