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1、胚乳和蔗糖对大麦成熟胚无菌苗生长和叶片切段愈伤组织诱导及分化的影响一生物技术3(5):30～34,1993Biotechnology胚乳和蔗糖对大麦成熟胚无菌苗生长和叶片切段愈伤组织诱导及分化的影响梁海曼张能义,/赵颖E———————一———————一r(札..l大学生物系,杭州),)}8g走麦无菌苗的苗高苗干重和单位长度,叶片切段的干重均依胚培养时所带胚乳的增多而递增.但叶片切段培养时的愈伤组织诱导率和再分化率并不与胚乳多少正相关.成熟胚培养时蔗糖的供应明显影响叶片幻段培养时的愈伤组织诱导辛.培养带胚乳的胚,用萌发牵高的新鲜种子培养无菌苗时,以不供给蔗糖的有较高的叶段愈伤纽织诱导率,用
2、萌发率显着降低的陈种子时,剐以育苗时供给6蔗糖为好.关键词:.』,嗵坚塾些植物组磐养研究中的外植体颇多取自PEG6000中26℃下浸种3小时,再用滤纸将幼苗一般在取材时比较重视品种,苗龄,种子表面吸干.然后将部分种子用刀l片切去器官种类和部位的选择,对育苗条件的影响一半胚乳或大部分胚乳.垒部种子用1.04则较少注意.禾本科植物的叶片鬯养还有一次氯酸钠灭菌15分钟,无菌水冲洗4—5次定难度.为此,我们以大麦成熟种子为材后,分别接种于不含蔗糖,含3%蔗糖或含料,试验了胚乳的存在与否和蔗糖的供应状6蔗糖的MS基本培养基,琼脂浓度况对大麦成熟胚无菌苗生长和幼苗叶片切段0.8争6,pH5.8.每1
3、培养管中接种成熟胚(种诱导愈伤组织和愈伤组织再分化的影响.本子)5～6个.培养温度22_4-1℃,前4天试验的目的:一以探索通过筛选育苗条件提暗中培养,最后1天24小时光照下培养,光高禾谷类叶段外植体睹养反应能力的可能照强度14001x.性,二则希望在考虑幼苗外植体素质时对于苗高和干重的测定:取5天苗,切去育苗条件的影响能弓I起更多的注意.根,测量苗高后,切成lcm长切段置称量皿中,120℃下烘15分钟后,在7O℃下烘至恒材料和方法重,称出苗的干重.材料为大麦早熟3号<llord;eum"fdre.cv.z0oshu3)经漂浮去秕和粒选的饱满的成熟种子.新的健康种子的种子萌发率和胚
4、培养萌发率均在95%以上,经过贮存自然老化种子的种子萌发率在6O左右,胚培养萌发率仅20%左右.种子经5O硫酸26℃下浸泡2小时,水洗至洗涤水的pH值为中性,去颖壳,在10叶片切段培养:取茁龄5天的无菌苗,剥去芽鞘,从第1叶叶基O—atom切取叶段按种于谤导培养基,每管接种3—4段,每一处理接种1O管以上.诱导培养基为MS基本培养基+2.4一Damg/L+ABA0.5mg/l+蔗糖3+琼脂O.8,pH5.8.22±1℃,暗中培养.车文于1蚰2年12月1B日收到?浙省自然科学基金资助项粱海曼等:胚乳和蔗塘对大麦成熟胚无菌苗生长和叶片切段愈伤组织诱导及分化的影响叶段接种后5天开始观察记录愈伤
5、组织诱导情况,并测量各叶段的氏度.统计愈伤组织诱导率时以切段为单位统计,不论切段一端或二端出愈伤组织均以1个切段产生愈伤组织计,叶段愈伤组织的分化培养试验:在叶段愈伤组织的大小为3mm左右时,切下愈伤组织转入分化培养基,每培养管接种)块愈伤组织,每l处理接种2O管.分化培养基为MS基本培养基+2.4一DO.CSmg/L+KTq.1mg/L+蔗糖3+琼脂0.8,pH5.8,25±1℃,24小时连续光照下培养,光照强度1400Ix.实验结果从表l可以看出:1.成熟胚萌发时,随所带胚乳量的增加而苗高,单位长度茁干重及叶片切段在诱导培养舷州的伸长均递增.2.成熟胚带少量胚乳进行萌发对,培荠基中供
6、应3蔗糖有利于苗的生长和干物质积累.成熟胚带...半或垒部胚乳进行萌发时,供应3蔗糖对苗的生长和干物质积累无促进作用或促进作用不大.3.叶片切段培养时的愈伤组织诱导率不与青苗时的肛乳量及蔗糖供应正相关.以上事表明t营养供应明显促进成熟胚萌发时的幼茁生长和干物质积累,但并不一定能明显倔进叶段愈伤组织的诱导.切去绝大部份胚乳后再进行成熟胚萌发时,3蔗糖的供应对叶段愈伤组织的早期发生是有利的.为了进一步明确糖的影响,在带l/2胚乳的基础上进行了育苗时供应蔗糖的浓度试验.由表2可见:1.蔗糖浓度提高至6,与3%蔗糖相比,不能进一步促进茁的生长和干物质的积累2叶臣培养时的愈伤组织诱导率,有随育菡时
7、蔗糖浓度升高面下降0趋势.由于育苗时的蔗糖浓度由3升高至6并不影响单位长度苗千重和叶切段培养后的伸长幅度,却明显降低了愈伤组织诱导率,看采,干物质积累并非愈伤组织诱导∞决定性因素对于叶片切段的愈伤组织诱导,在带l/z匪乳进行j茈熟匪格葬时连以筇加蔗糖为好.考虑到垒年进行幼苗叶段培养试验时,必然有一龆份种子是经过较长时间贮存的,种子活力可能有所下降,我们采用已贮存一年萌发率已显着下降的老化种子进行l了和袭l相同的试验,结果如表3所示:
