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时间:2018-07-31
《我国弓形虫病核酸疫苗研究概况_论文》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、我国弓形虫病核酸疫苗研究概况关键词:弓形虫病StatusintheresearchofnucleicacidvaccineagainsttoxoplasmainChina.刚地弓形虫(简称弓形虫)呈世界性分布,哺乳动物及鸟类普遍易感。人类对弓形虫有较强的自然免疫力,感染后绝大多数无明显症状表现,或只出现亚急性弓形虫病。但在孕妇及免疫功能低下者(如ADIS病、器官或组织移植后接受免疫抑制剂治疗的病人等)感染弓形虫后引起的危害严重。人体弓形虫感染日益受到关注,弓形虫病疫苗成为当前研究的热点。动物实验发现,弓形虫全虫疫苗,弓形虫特异抗原组分
2、疫苗有预防弓形虫感染或降低感染度作用,但前者可能会引起再感染,后者的免疫保护效果较差。弓形虫病核酸疫苗克服了上述疫苗存在的不足,具有良好的开发应用前景。我国从上世纪90年代后期开始了弓形虫病核酸疫苗的研制,通过对表达保护性抗原蛋白基因进行重组,先后研制出弓形虫基因单价疫苗、复合疫苗和混合疫苗。动物实验证明部分疫苗具有良好的免疫预防效果。18/181保护性抗原及目的基因研究弓形虫裂殖了表面膜蛋白(SAG)[1,2],致密颗粒蛋白(GRA)[3]和棒状体蛋白(ROP)[4]是重要的弓形虫抗原,这些抗原物质与弓形虫的侵袭性有关,且能诱导宿主
3、的免疫反应。是弓形虫裂殖子表面膜蛋白。通过对SAG的分子结构、生物学和免疫学特性研究发现,有5种(分别命名为P22、P23、P30、P35利P43)与弓形虫病免疫有关。(SAGl)P30分子质量30~35kDa含量约占虫体总蛋白的3%~5%,主要存在于弓形虫表膜及内膜系统,也可分泌到虫体外环境。P30是重要的弓形虫表面膜蛋白,与虫体的吸附和入侵有关,能被弓形虫急性感染期及恢复期血清抗体识别。动物实验证明,用纯化的P30蛋白免疫小鼠可显著提高小鼠抗弓形虫感染能力[5]。为提高免疫效果,于瑾等[6]构建了含有霍乱毒素A2/B亚基基因和P3
4、0基因的重组表达质粒,转化宿主菌BL2l后经IPTG诱导产生30-CTA2/B融合蛋白。游东生等[7]将P30重组表达质粒转化入DH5α,Westernblot证明IPTG诱导表达的P30抗原分子能被抗弓形虫血清识别。18/18(SAG2)SAG2是一个基因家族,包括SAG2B、SAG2C和SAG2D。其中SAG2B表达于速殖子表面,而SAG2C和SAG2D仅表达于缓殖子的表面。研究证明,P22蛋白参与弓形虫的入侵过程,并且与弓形虫速殖子向缓殖子的转化有关。P22的抗原性较弱,但仍能提高免疫动物的免疫水平。姚永伟等[8]用PCR法从R
5、H株弓形虫基因组DNA中扩增P22基因编码序列,克隆入载体pET-32a,转化大肠埃希菌BL2l,IPTG诱导的表达产物能被兔抗弓形虫血清识别。龙彩虹等[9,10]构建的P22重组质粒转化宿主菌的IPTG诱导表达产物也被证明具有良好的抗原性。研究发现,P35蛋白的C端区(201~225及301~340号氨基酸)具有高亲水性,利用蛋白质分析软件分析P35基因编码的氨基酸序列,发现其编码的氨基酸序列含有多个T、B淋巴细胞表位,证明P35蛋白具有抗原性。林敏等[11]采用RT-PCR技术从弓形虫cDNA文库中扩增出编码P35抗原的基因片段,
6、构建了弓形虫RH株表面抗原P35基因重组表达质粒P35/pGEX-21,并在大肠杆菌JMl09中成功表达了分子质量为70kDa融合蛋白,该蛋白能为谷胱甘肽S转移酶(GST)单克隆抗体及弓形虫感染的兔血清所识别。18/18与其它弓形虫表面腆蛋白不同,P23不是GPI锚定蛋白,P23的N端连接有糖基化位点,是慢性弓形虫病的一个分子标志。疫苗研究发现,24kDa的多肽物质能诱导产生一定的免疫保护力。用24kDa多肽免疫动物后,在该动物血液中检测到了抗P23抗体[12]。闪此认为P23可能包含该多肽的免疫表位,其基因序列可能存在同源性。是有希
7、望的弓形虫病疫苗候选基冈。弓形虫致密颗粒秆放多种蛋白(GRA),已经报道的有8种,其中研究较多的有GRAl、GRA4、GRA6手GRA8。是慢性弓形虫病的标志性抗原分子。研究表明,GRAl可诱导免疫动物产生以IFN-R升高为特征的保护性细胞免疫应答。彭碧云等[13]将构建的GRAl基因重组质粒用脂质体介导,转染到小鼠巨噬细胞,光学显微镜观察形态学改变并绘制生长曲线。结果证明重组质粒的表达产物使巨噬细胞增殖能力增强。贾雪梅等[14]利用PCR技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出GRAl基因片段,成功构建了pEGFP-N3-GRAl真核
8、表达重组质粒。18/18蛋白分子质量为40kDa,存在于弓形虫的致密颗粒及纳虫泡中,当速殖子分裂并侵入细胞时GRA4被分泌到细胞外,刺激机体免疫系统产生粘膜免疫及全身免疫。林绮萍等[15]根据GRA4基因序列,设计并合成
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