HPLC法测定广东土牛膝中腺苷的含量.doc

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1、HPLC法测定广东土牛膝中腺苷的含量作者：卢绮雯，李坚，萧鹏，谢艳婷【摘要】目的测定广东土牛膝中腺苷的含量。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱：DiamonsilTMC18柱，流动相：甲醇磷酸盐缓冲溶液（体积比12∶88），流速：1.0mL·min-1，检测波长260nm，柱温30℃。结果腺苷的平均回收率为99.5%，RSD值为1.69%;方法精密度试验RSD值为1.15%(n=6)。结论该法可用于广东土牛膝中腺苷的含量测定。【关键词】广东土牛膝；腺苷；HPLC；含量测定　　Abstract:ObjectiveTodeterminethec

2、ontentofadenosineinRadixEupalorriChinenseLinnbyRPHPLC.MethodsSampleswereanalyzedonaDiamonsilTMC18column（250mm×4.6mm，5μm）usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephase.Theflowratewas1.0mL·min-1andthedetectionwavelength260nm.ResultsThemethodexhibitedgoodlinearityfrom0.0396to

3、0.6336μg.Theaveragerecoveryforadenosinewas99.5%andRSD1.69%(n=6).ConclusionThemethodcouldbeusedtodetermineadenosinecontentinRadixEupalorriChinenseLinn.　　Keywords:RadixEupalorrichinenseLinn;adenosine;RPHPLC　　广东土牛膝（RadixEupalorriChinenseLinn）为菊科植物华泽兰的干燥根及根茎，广东土牛膝资源丰富，分布较广，在民间

4、沿用历史悠久，具有清热解毒、凉血利咽、抗炎镇痛的功效［1,2］，临床上常用于治疗各种咽喉炎、扁桃腺炎等。为评价广东土牛膝的内在质量，本文以腺苷为指标成分［3］，建立了广东土牛膝中腺苷含量测定的高效液相色谱法，该法具有分离效果好，简便、准确等优点，可用于该药材的初步质量控制。　　1仪器和试药　　1.1仪器　　日本岛津高效液相色谱仪(LC10ATvp溶剂输送泵，SPD10Avp紫外可见检测器，CTO10Asp柱温箱)，HW2000色谱工作站（南京千谱软件公司）。　　1.2药材来源及处理　　　土牛膝样品（批号20051102，东莞国药集团

5、中药饮片有限公司，产地广东；批号20060109，东莞国药集团中药饮片有限公司，产地广东；批号0500201，佛山康泰和医药有限公司中药饮片加工厂，产地广东），由广东药学院生药学教研室刘基柱副教授鉴定为菊科泽兰属植物华泽兰(Eupalorrichinense4Linn)的根及根茎。将其粉碎，于60℃下干燥4ｈ，置干燥器内备用。　　1.3药品与试剂　　腺苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号879-200202，供含量测定用）；甲醇为色谱纯，水为双蒸水，磷酸二氢钠和磷酸氢二钠均为分析纯。　　2实验部分　　2.1溶液的制备　　2.1.1供试品

6、溶液　　取本品粉末（过3号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%（体积分数）的甲醇20mL，称定重量，超声处理45min，放冷，再称定重量，用50%（体积分数）甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。　　2.1.2对照品溶液　　精密称取腺苷对照品9.90mg，置50mL量瓶中，加50%（体积分数）的甲醇适量，振摇使溶解，再加50%（体积分数）的甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为198μg·mL-1的腺苷对照品贮备液。　　2.2色谱条件及系统用性试验　　　　色谱柱：DiamonsilTM(钻石)C18柱（250mm×4.6mm，5

7、μm，迪马公司）；流动相：甲醇磷酸盐缓冲溶液［取0.01mol·L-1磷酸二氢钠68.5mL与0.01mol·L-1磷酸氢二纳31.5mL混合（pH＝6.5）］（体积比12∶88）；流速：1.0mL·min-1，检测波长：260nm；柱温：30℃。分别取对照品溶液（腺苷浓度为7.92μg·mL-1），供试品溶液20μL注入色谱仪，按上述色谱条件，记录色谱图（图1,2）。腺苷和样品中相邻色谱峰的分离度大于1.5；理论塔板数以腺苷峰计算不低于3000；保留时间约为17.40min。　　图1腺苷对照品HPLC图　略　　图2广东土牛膝药材样品HPL

8、C图　略　　2.3方法学考察　　2.3.1线性与范围　　分别精密吸取一定量的对照品贮备液用50%（体积分数）的甲醇稀释成浓度为1.98、3.96、7.92、15.8