hplc法测定辽宁地区苦碟子中腺苷的含量

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1、HPLC法测定辽宁地区苦碟子中腺苷的含量【关键词】苦碟子;腺苷;样品含量测定;HPLC　　AbstractObjective：To　establish　a　method　for　quantitative　determination　of　adenosine　in　Ixeris　by　HPLC.Method：HPLC　ed　on　a　column　of　Phenomenex　Gemini　C18　(250　mm　×4.6　mm，5　μm)，and　Acetonitrileobilephase　　and　flol/min.Results：The　method　had　good　linear　re

2、lationship　ethod　is　simple，accurate　and　reappearance.　It　can　be　used　for　quality　control　of　Ixeris.　　Keyination　ofthe　contentofsample;HPLC　　苦碟子为菊科植物抱茎苦荬菜[Ixeris　sonchifolia(Bge.)Hance]　的当年生干燥全草，分布我国的东北、内蒙古等地，具有清热解毒、排脓痛之功效，临床用于治疗冠心病、脑梗塞等疾病，疗效显著。腺苷为苦碟子的主要有效成分，能抑制血小板聚集，明显增加纤维蛋白酶活性，对冠心病、实验性心肌梗死有明显的治疗作用[

3、1]。本文建立了HPLC方法测定苦碟子药材中腺苷含量，方法准确、可靠，可用于苦碟子的质量控制[2]。　　1仪器与试药　　高效液相色谱仪：日本岛津LC6A;紫外检测器：日本岛津SPD6AV;色谱柱：DIKMA　C18，N2000色谱工作站(浙江大学智达信息工程有限公司);超声波发生器：上海精密科学仪器有限公司;电子分析天平：上海精密科学仪器有限公司FA2004B，日本岛津AEL40SM。腺苷对照品：中国药品制品检定所(批号：110879200202);乙腈为色谱纯(山东禹王，批号：080211)。苦碟子药材均由辽宁中医药大学职业技术学院栽培教研室张建军老师采摘自辽宁地区，并经本院胡德奇

4、副教授鉴定。　　2方法与结果　　2.1溶液制备　　2.1.1对照品溶液的制备精密称取腺苷对照品10.94　mg，置于25　ml量瓶中，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀(0.4376　mg/ml);再精密吸取2　ml，置于25　ml量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，即得(35.0　μg/ml　)。　　2.1.2供试品溶液的制备取干燥本品全草，粉碎，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水50　ml，密塞，超声40min，过滤，浓缩，用水定容至10　ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45　μm)滤过，取续滤液即得。　　2.2色谱条件与系统适用性试验色谱柱：C18柱(250　mm×4.6　mm，5　μm，

5、迪马公司);流动相：乙腈-水(9∶91);检测波长：260　nm;流速：1.0　ml/min;柱温：室温;理论塔板数按腺苷峰计算不低于3　000。在上述色谱条件下，对照品和样品的色谱图见图1。　2.3线性关系的考察精密吸取对照品溶液(35　μg/ml)2，4，6，8，10，12　μl分别进样，以峰面积对进样量线性回归，回归方程为：Y=92246X　+101279，r2=0.9998。结果表明腺苷进样量在0.070～0.70　μg　范围内与峰面积呈良好的线性关系。　　2.4供试品溶液精密度实验按供试品溶液制备方法操作，制备样品。精密吸取溶液10　μl，重复进样6次，记录色谱图，结果峰面积RSD=

6、0.59%，表明色谱系统精密度良好。　　2.5样品稳定性实验精密吸取苦碟子药材的供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10，12　h进样，记录色谱图，结果峰面积的RSD为0.91%，实验表明供试品制备后，溶液在12h内色谱峰无明显变化，样品稳定性良好。　　2.8样品含量测定分别取辽宁地区不同地点的苦碟子药材，照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10　μl注入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行分析测定，用外标法计算各样品中腺苷含量。结果表明，苦碟子药材产地不同其腺苷含量有一定差异。样品测定结果见表2。表2不同产地苦碟子药材中腺苷含量ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦ产地海城下林海城

7、东四牛庄桓仁锦州朝阳上河叶柏寿含量　　3讨论　　样品提取条件考察时，曾比较用水煎煮、20%乙醇、甲醇溶液分别回流提取、超声提取，结果以超声提取方法简便，测得的含量较高，故选择用超声提取样品。流动相的选择：综合考虑文献报道的条件，采取了甲醇-水(9∶91)、乙腈-水(6∶91)、乙腈-水(9∶91)，结果以乙腈-水(9∶91)分离时间和效果最好，故选择此流动相。通过精密度、稳定性、回收率等相关实验，