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1、鸡新城疫的实验室诊断技术畜牧与饲料科学AnimalHusbandryandFeedScience2009,30(11—12):111—113鸡新城疫的实验室诊断技术刘峰(安徽省金寨县南溪镇畜牧兽医站,安徽金寨237361)摘要:鸡新城疫是由新城疫病毒引起的鸡的急性高度接触性传染病,强度感染常呈败血症经过,主要特征是呼吸困难,下痢,神经紊乱,黏膜和浆膜出血.该病传播迅速,死亡率很高,是严重危害养禽业的重要疾病之一,可造成巨大的经济损失.实验室检查有助于对新城疫(ND)的确诊.主要对病毒分离,病毒鉴定,致病指数测定和血清学诊断等鸡新城疫的实验室诊断技术进
2、行了阐述,以期为新城疫的尽早确诊,提供参考依据.关键词:鸡新城疫;新城疫病毒;实验室诊断技术中图分类号:$858.315.3文献标识码:A鸡新城疫又称亚洲鸡瘟,是由副黏病毒科腮腺炎病毒属的新城疫病毒引起的,不同日龄的鸡易感性有差异,幼雏和中雏易感性最高,2年以上的鸡易感性较低.鸡发病后的主要特征是呼吸困难,下痢,神经紊乱,黏膜和浆膜出血.成鸡产蛋下降,感染率和致死率高.该病在我国已流行多年,是危害我国养鸡业最严重的烈性传染病之一.国际兽疫局(OIE)将其列为A类传染病.根据鸡新城疫的流行病学,临诊症状和病理变化进行综合分析,可对该病作出初步诊断.而实
3、验室检查则有助于新城疫的确诊.病毒分离和鉴定是诊断新城疫的最可靠方法.但应注意,从鸡群分离到的NDV不一定是强毒,还不能证明该鸡群流行ND.因为有的鸡群存在弱毒和中等强度的NDV,所以分离出NDV还得结合流行病学,临床症状进行综合分析,必须对分离的毒株做毒力测定后,才能作出确诊.1样品的采集和处理当鸡群疑似有新城疫发生时,可采集样品进行病毒分离,自新死亡或濒死鸡采集气管,肝,肾,脾,肺,脑,肠(包括内容物)和心等组织单独或}昆合作为病毒分离的样品:活鸡收稿日期:2009—11一ll作者简介:刘峰(1962一),男,畜牧师,主要从事畜牧兽医技术推广工作
4、抗原制备法同样处理,即为被检抗原.4.2.3琼脂平板制备:琼脂粉1g,8%氯化钠溶液100mL,加热使其完全溶解后,再加入1%硫柳汞溶液1mL,向平皿内倒人20mL,冷却后打孔备用.4.2.4试验方法4.2.4.1检测抗体:用已知琼扩诊断抗原可以检测主动免疫鹅血清中的抗体,检测病愈鹅血清中的抗体,检测制备的小鹅瘟高免血清或进行小鹅瘟的流行病学调查.在中央孔加抗原,周边孔加备检血清.该方法简单易行,可以检测大批量的血清.4.2.4.2检测抗原:取病死鹅的肝,脾,脑,胸腺或肠道病料,按前述方法制备待检抗原,同已知的小鹅瘟阳性血清进行琼扩试验.中央孔加阳性
5、血清,周边孑L加待检抗原.4.2.5结果判定:将加完抗原与血清的平肌放室温(20～25℃),24～48h,观察结果和判定,在抗原与血清孔之间出现沉淀线时,即判定为阳性反应.若要检测血清中的抗体效价时,可在中央孔加抗原.周文章顺序编号:1672—5190(2009)11一Ol11-03则用气管拭子和泄殖腔拭子采集样品,泄殖腔拭子需有可见的粪便:雏鸡则因用拭子采集样品时,可能对其造成伤害,可收集新鲜粪便为样品.拭子应浸没于抗生素溶液中,粪便和组织样品可用抗生素溶液制成10%～20%悬液.抗生素溶液是以缓冲盐水配制,pH值7.0～7.4(加入抗生素后测定)
6、.抗生素品种和浓度可视具体情况而定.可选用的抗生素品种和浓度为:青霉素2000IU/mL,链霉素2000~g/mL,庆大霉素50~g/mL,卡那霉素50~g/mL,制霉菌素1000~g/mL.如果处理的样品为粪便和泄殖腔拭子时,则其浓度应提高5倍.样品应尽快处理,首先在室温下静置1～2h,若没有条件时,可暂放4℃冰箱内保存,保存期不得超过4d,若要保存更长的时间,则样品需置于一20℃以下的冰冻条件下,多数新城疫病毒经一次冻融之后仍可存活.但在感染性方面有轻微损失.2病毒分离粪便或组织悬液在室温静置1～2h后,经1000r离心10min.取0.1mL上
7、清液接种于5个9～11日龄的SPF鸡胚(或种母鸡未经新城疫免疫的鸡胚)尿囊腔,37qC孵育4～7d,收集死亡和濒死鸡胚的尿囊液.孵育结束时将存活的鸡胚置于4℃冰箱内冷却,随后收集其尿囊液,检查每一胚尿囊液的HA活性,阴性者再用鸡胚传代一次.边孑L加倍比稀释的血清(1:2,1:4,l:8…),能同抗原出现沉淀线的最高稀释倍数的血清即为该血清的效价.检测病死鹅体内的抗原时,用单一脏器的检出率不能达到100%,如果对同一只鹅的多个脏器做检测,有一个脏器出现阳性反应即判为阳性.则对小鹅瘟的检出率可达100%.参考文献:[1]周碧君,郑大恒,温贵兰,等.小鹅瘟
8、病原学与检测方法的研究[J].中国预防兽医,2005,27(4):290—294.[2]杨晓杰,冷雪,于希贵
