密环菌的栽培技术

《密环菌的栽培技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、密环菌的栽培技术（一）菌种分离与培养１．菌种来源从我国各地培育蜜环菌情况看，对菌种来源可分为三类：一是采取野生菌种；二是从外地单位引入菌种，再进行扩大培养；三是纯菌种分离和培养。但以纯菌索粗壮、生长快、发射荧光强、抗逆性好，适应性强的蜜环菌作为菌种。２．纯菌种的分离和培养菌种组织分离与培养（母种）配方一马铃薯（去皮）２００克;葡萄糖２０克;琼脂２０克;水１０００毫升配制方法：将马铃薯切成小块放入锅内，加水1000毫升，煮沸２０分钟，用纱布过滤，补水到1000毫升,放入切碎的琼脂和葡萄糖，加温溶解后，ｐＨ值自然，将培养基分装三角烧瓶内或分装于试管中，灭

2、菌、放斜面、冷却接种．培养等，与其它食用菌的培养基配制及制种方法均相同。配方二麦麸４０克；葡萄糖２０克；琼脂２０克；水１０００毫升配制方法：麦麸加水１１００毫升煮微２０分钟，用双层纱布过滤，滤液补水至１０００毫升，放入琼脂，加热溶解后，再加葡萄糖煮至全溶，ｐＨ值自然。然后分装试管或三角烧瓶，再高压灭菌，放斜面、冷却、接种、培养，即获得母种。如果是药用，只培养蜜环菌丝体，也就是进行一级扩大培养和二级扩大培养。３。一级扩大培养用斜面纯菌种接种在一级种子培养液中，在一定的条件下进行一级扩大培养。（１）一号种子培养液配方：葡萄糖２０克；磷酸二氢钾２克；磷酸氢

3、二钾１克；硫酸镁１．５克；黄豆饼粉或花生饼粉１０克；酵母粉或麦芽１克一２克维生素１１０毫克；２０％马铃薯汁１０００毫升配制后调ＰＨ值到５．５，分装于５００毫升的三角瓶内，每瓶装１５０毫升，高压灭菌，备用。（２）二号种子培养液配方：马铃薯（去皮）２００克；葡萄糖２０克；硫酸镁０．５克；磷酸二氢钾１.５克，蛋白胨３克；维生素Ｂ1１０毫克，清水１０００毫升培养液培养后，ｐＨ值自然，分装于５００毫升三角烧瓶中，每瓶装１５０毫升，高压灭菌，备用。（３）三号种子培养液配方：麦麸５０克；葡萄糖２０克；硫酸镁０．５克；磷酸二氢钾１.５克，蛋白胨５克，清水１０００毫升

4、配制方法：先将麦麸水煮２０分钟，用纱布过滤，补水至１０００毫升，再将其经配料加入滤液中溶解，ＰＨ值自然，分装于５００毫升的三角烧瓶内，每瓶装５０毫升，高压灭菌，备用。接种方法：在无菌条件下用接种钩将斜面菌种打碎，然后转移到培养瓶内。装量１５０毫升的培养瓶可转移一个斜面的菌种，装量为５０毫升的瓶，可转移１／３斜面的菌种。接种后用４层纱布夹回层无菌棉塞瓶口。接种完毕要扎紧瓶口，置室温２５度的摇床上进行振荡培养。培养１．５天一２天后，可见培养液发出荧光，３天一４天培养液呈米黄色，荧光增加，轻摇培养瓶时，液面布满荧光点，５天一７天后荧光逐渐减弱。如果发现培养

5、液的荧光突然消失，并出现大量泡沫，就表明已被杂菌污染，应立即淘汰。培养液的荧光最强时，菌丝生长繁殖最旺盛，应停止培养，即为一级种子。优质的一级种子液粘稠，呈米黄色，或象米粥。菌液中长有黄豆粒大小的菌球体，如培养时间过长，菌液老化，菌球体则变为中空、表面光滑的球体，但这种菌液仍能发微弱荧光。被污染的菌液，有时也有光滑的小球体，但不发荧光。４．二级扩大培养为大量培养纯菌种，或大量培养药用的蜜环菌丝体，可在１０００毫升一５０００毫升的大烧瓶中进行二级扩大培养，也可利用发酵罐进行培养，因此，也叫发酵培养。（１）一号发酵培养液配方：葡萄糖２０克；酵母粉３克；磷

6、酸二氢钾２．５克；硫酸镁１．５克；麦麸２０克；维生素Ｂ1１０毫克；２０％马铃薯汁1000毫升培养液配制后，ｐＨ植调至５．５，分装，高压灭菌，备用。（２）二号发酵培养液配方：葡萄糖１％；白蔗糖２％；磷酸二氢钾０．１５％；硫酸镁０．０７５％；黄豆饼粉１％；花生饼粉１％配制后．PＨ值自然，分装，高压灭菌，备用。接种时，要严格按无菌制作的程序进行。用移液管将菌种接入一级种子液，在２５度条件下培养３天一４天5．种子液培养条件（１）一级种子温度２４－２６度，在旋转式摇床上培养１２０天一１４８天，偏心距为４厘米一６厘米，转速２４０次／分钟。（２）二级种子温度２６－

7、２８度，在往复式床上培养７２小时一96小时，冲程为７厘米，转速为90次／分钟。（３）发酵罐温度２６－２８度，容量为４０立升的，投料２０立升，搅拌速度为200转／分钟，通气量为１：0．５－１：0．８，培养９６－１２０小时。用乙醇提取，再浓缩，将提取物人药。６．二级团体扩大培养为了利用蜜环菌伴栽天麻，可将蜜环菌采用固体扩大培养，它比液体培养效果好。二级固体菌种培养基（即原种培养基）配方（１）：杂木屑或玉米芯粉６８％；玉米粉２０％；麦新１０％；蔗糖；２％。配制方法：清水拌料，含水量６５％－７０％，装瓶或装袋，灭菌，冷却后接种，在２０－２５度条件下培养２５天

8、一３０天，即成二级固体菌种。配方（２）：杂木屑４６％；玉米轴粉４０％；麦麸１０％；蔗糖２％；骨粉１％；石膏粉