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1、响应曲面法优化铁皮石斛多糖提取条件2011年9月第13卷第9期中国现代中药ModernChineseMedicineSep.2011Vo1.13No?9工艺响应曲面法优化铁皮石斛多糖提取条件△李光,李学兰,孙慧峰,刀兆玲(1.中国医学科学院药用植物研究所云南分所,云南景洪666100;2.黑龙江中医药大学药学院,黑龙江哈尔滨150040;3.云南中医学院,云南昆明650500)[摘要]目的:应用响应曲面法优化铁皮石斛多糖提取的最佳工艺条件,为应用于生产提供参考.方法:在单因素试验的基础上,采用响应曲面法的中心组合设计,考察分析提取温度,提取时间,提取次数,液料比4个主
2、要因素对石斛多糖提取率的影响,对铁皮石斛多糖的提取工艺参数进行优化分析.结果:铁皮石斛多糖提取的最优条件为:提取温度为100oC,提取时间为2.5h,料液比1:17.2(ⅡV),提取次数为3次.在此条件下,理论计算提取率达到51.12%,实测提取率为51.08%,与模型高度拟合.结论:该工艺便捷,快速,易操作,得率较高,可用于铁皮石斛多糖的提取.[关键词]铁皮石斛;多糖;响应曲面法;提取工艺石斛多糖是铁皮石斛DendrobiumofficinaleKimu—raetMigo中最主要的有效成分¨J.现代药理学研究表明,铁皮石斛中石斛多糖具有较强的药理活性引,具有较高的开
3、发价值.影响铁皮石斛多糖提取率的因素很多,如提取温度,提取时间,提取次数,物料比等,常规优化方法得到的提取工艺不能全面展示各因素间的相互影响,实际操作过程中造成很多产量损失.目前多糖提取工艺研究多采用正交试验设计,但该方法不能在给出的整个区域上找到因素和响应值之间的一个明确的函数表达式即回归方程,从而无法找到整个区域内因素的最佳组合和响应值的最优值.响应曲面法以其试验次数少,周期短,求得的回归方程精度高,能研究几种因素间交互作用的诸多优点,在很大程度上满足了这些要求.目前,多种植物多糖都用响应曲面法进行测定,都能够优化得到很好的提取率.关于响应曲面法优化铁皮石斛多糖提
4、取工艺方面的研究尚未见有报道,作者在单因素试验的基础上,采用响应曲面法对铁皮石斛多糖的提取温度,提取时间,提取次数,液料比4个因素的3个水平进行中心组合试验研究,分析得出最佳提取工艺参数,以为今后扩大应用和工业化生产提供依据和参考.1材料,仪器与试药1.1材料铁皮石斛(购自西双版纳增靓生物科技有限公司).1.2仪器数显恒温水浴锅(国华电器有限公司),电子天平(赛多利斯公司),分析天平(赛多利斯公司),SHB.IV双A循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司),TGL16M湘智离心机(安徽诚信启动设备有限公司),uV.1901分光光度计(北京普析仪器有限公司),旋转蒸
5、发器RE一52A(上海亚荣生化仪器厂),GZX-9140MBE数显鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂),玻璃仪器气流烘干箱(武汉科尔仪器设备有限公司).1.3试药D一无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所),水为超纯水,乙醚(分析纯,天津市风船化学试剂科技有限公司),无水乙醇(分析纯,天津市风船化学试剂科技有限公司),苯酚(分析纯,天津市大茂化学试剂厂),浓硫酸[重庆川东化工(集团)有限公司化学试剂厂],三氯甲烷(分析纯,天津市风船化学试剂科技有限公司).2方法2.1铁皮石斛多糖提取工艺精密称取铁皮石斛干燥粉末0.5000g(过3号筛),置圆底烧瓶中,按设定
6、的提取条件(液料比,提取温度,提取时问,提取次数)进行回流提取,提取时将反应容器置于恒温水浴锅中,提取反应完成后,待料液冷却后通过抽滤进行汁渣分离,弃去[基金项目]中央级公益性科研院所基本科研业务专项(YZYN10-01)[通讯作者]李光,Tel:(0691)2136981;E-mail:lhbg311@hotmail.corn?29?2011年9月第13卷第9期中国现代中药ModemChineseMedicineSep.2011Vo1.13N0.9沉淀,得多糖浸提液,提取液置250mL容量瓶中定容.将以上所得的提取液,分别精密量取1mL滤液置10mL的离心管中,精密
7、加入5mL无水乙醇,摇匀,冷藏1h,取出,离心(转速为4000r?min)20rain,弃去上清液,沉淀加80%乙醇洗涤2次,每次10mL,弃去上清液,沉淀加热水溶解,转移至25mL容量瓶中,放冷,加水至刻度,摇匀,即得.2.2标准曲线的制备取无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成1mL中含9Og的溶液,精密量取对照品溶液0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL,分别置10mL具塞试管中,各加水补至1.0mL,精密加入5%苯酚溶液1mL(临用配制),摇匀,再精密加硫酸5mL,摇匀,置沸水浴中加热20min,取出,置冰浴中冷却5min,以相应试剂为
