曲尼斯特对大鼠血管平滑肌细胞增殖、凋亡及p、c-myc表达影响

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1、曲尼斯特对大鼠血管平滑肌细胞增殖、凋亡及p57、c-myc表达的影响硕士研究生秦辉导师刘厂辉中文摘要目的观察曲尼斯特对大鼠血管平滑肌细胞（AVSMC）增殖、凋亡及对p57、c-myc表达的影响，初步探讨其可能的作用机制。方法酶消化法原代提取SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行体外培养，取5-8代细胞进行实验。细胞按药物加入浓度不同共分为5组，分别为曲尼斯特0、12.5、25、50、100mg/L组，MTT比色法测定药物处理12、24、48小时后各组细胞增殖速率，流式细胞学和原位细胞凋亡检测试剂盒法（TUNEL）检测药物处理12小时后细胞凋亡情况

2、，RT-PCR法分别检测药物作用48小时后p57表达及作用12小时后c-myc表达情况。结果MTT比色法观察发现不同浓度曲尼斯特组细胞生长率较对照组降低，其生长抑制率随曲尼斯特加入浓度和时间增加而增加（P〈0.05），表明曲尼斯特抑制VSMC增殖在一定范围内存在浓度和时间依赖，经RT-PCR扩增后，凝胶成像可见VSMC中P57表达随药物浓度的增加而增加，提示曲尼斯特可能通过诱导p57表达抑制细胞增殖；流式细胞学和原位细胞凋亡检测试剂盒法（TUNEL）检测VSMC细胞凋亡示细胞凋亡率较对照组增加,并且随着曲尼斯特浓度的增加VSMC凋亡率越来越高（P

3、〈0.05），表明曲尼斯特诱导VSMC凋亡在一定范围内存在浓度依赖，而RT-PCR扩增后的凝胶成像可见随着药物浓度增加VSMC细胞内c-myc表达减少，提示曲尼斯特可能通过抑制c-myc表达促进VSMC凋亡。1结论1尼斯特可抑制SD大鼠VSMC增殖，并且该抑制作用在一定范围内有浓度及时间依赖关系；曲尼斯特可诱导VSMC凋亡，并且该诱导作用在一定范围内有浓度依赖关系。2尼斯特可诱导SD大鼠VSMCp57mRNA的表达、抑制c-mycmRNA的表达，并且曲尼斯特对p57、c-mycmRNA表达的影响在一定范围内有浓度依赖关系。3尼斯特可能通过诱导P5

4、7mRNA的表达抑制VSMC增殖，通过抑制c-mycmRNA的表达来促进VSMC凋亡。关键词曲尼斯特，平滑肌细胞，p57，c-myc，增殖，凋亡，2TheEffectofTranilastonProliferationAndApoptosisofVascularSmoothMusleCellofRatinVitroCultureAndOnSecretionofp57andc-mycABSTRACTObjectiveToobservetheeffectofTranilastonproliferationandapoptosisofthoracic

5、aortavascularsmoothmuslecell(VSMC)ofratinvitro，andtostudyonthepotentialmechanism.MethodsPrimaryculturesofratVSMCswereobtainedfromenzymaticallydissociatedSDratthoracicaorta.Theexperimentswereperformedusingsubconfluentedcellsatpassagesfivethrougheight.VSMCsweredividedin

6、tofivegroupsaccordingtodifferentdrugconcentration.Thefivegroupswere0,12.5,25,50,100mg/LTranilastgrouprespectively.MTTcolorimetrywasusedforassayingprolixferationofVSMCsafter12,24,48hours.Apoptosisofcellstreatedwithdifferentconcentrationsofdrugsfor12hourswasobservedbyflowcytome

7、tryandTUNELApoptosisDetectionKit.RT-PCRwasusedfordetectingexpressionofp57inVSMCstrertedwithdifferentconcentrationsofdrugsfor48hours.expressionofc-mycinVSMCstrertedwithdifferentconcentrationsofdrugsfor12hourswasdetecteduseRT-PCRtoo.ResultMTTcolorimetryfoundthatthecellgrowthra

8、tesindifferentconcentrationgroupswerelowerthancontrol.Thegrowthinhib