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《3株乳酸菌体外拮抗致病性大肠杆菌试验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、3株乳酸菌体外拮抗致病性大肠杆菌试验（哈尔滨中科生物工程有限公司赵前）摘要:为研究乳酸菌体外对大肠杆菌的拮抗作用,将3株乳酸菌与2株大肠杆菌体外分别共培养观察拮抗情况。结果显示,等量同时间接种,96h内乳杆菌就将大肠杆菌全部抑杀;乳酸菌比大肠杆菌早24h接种,72h内将大肠杆菌全部抑杀;大肠杆菌比乳酸菌早24h接种,在120h内也可全部被抑杀。3株乳酸菌按一定比例复合,会使拮抗的效果增强。关键词:微生态、中药、益生素、发酵、乳酸杆菌;大肠杆菌;拮抗作用畜禽大肠杆菌病是畜牧业生产中常见传染病之一,对集约化养殖业危害极大。生产上由于大肠杆菌耐药情况非常严重
2、,给临床治疗此病带来困难。乳酸杆菌是畜禽肠道内主要的正常菌群,具有抗感染、免疫刺激等许多生理功能。本试验研究3株乳酸菌体外对大肠杆菌的拮抗作用,以期为乳酸菌用于预防治疗大肠杆菌病提供理论依据。1材料与方法1.1试验材料菌种:乳酸乳杆菌(Lactobacilluslactis,L.l)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus,L.a)、乳酸链球菌(Streptoccuelactis,S.l)分离自健康鸡肠道;大肠杆菌1701株由发病鸡场分离得到;大肠杆菌TM128株由江苏省农业科学院惠赠。培养基:改良MRS液体培养基、普通琼脂培养基
3、、普通肉汤培养基。1.2试验方法将乳酸乳杆菌、乳酸链球菌、嗜酸乳杆菌、大肠杆菌分别在各自适宜的培养基内繁殖,传1代。取20h培养物,调整菌的浓度为10^7CFU/mL。取含改良MRS液体培养基试管4支,分别接种乳酸乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸链球菌及三者的混合物(50:50:2)100uL,同时再分别接种大肠杆菌1701或TM128各100uL;设大肠杆菌单独培养管作对照,置恒温培养箱37培养。取培养24、48、72、96、120h的培养液倒普通琼脂平板,检查大肠杆菌存活情况,记录含活菌数。取含改良MRS液体培养基试管4支,分别接种乳酸乳杆菌、嗜酸乳杆菌、
4、乳酸链球菌及三者的混合物(50:50:2)100uL,37培养24h后,分别接种大肠杆菌各100uL,置恒温培养箱37再培养;取培养24、48、72、96、120h的培养液倒普通琼脂平板,检查拮抗情况。取含改良MRS液体培养基试管4支,接种大肠杆菌各100uL,37培养24h后,分别接种乳酸乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸链球菌及三者的混合物(50:50:2)100uL,37℃再培养;取培养24、48、72、96、120h的培养液倒普通琼脂平板,检查拮抗情况。分别取上述各时间点培养物0.5mL,用灭菌生理盐水做连续稀释(10^-1－10^-10)后,用滴注法点
5、种于事先制作并烘干表面水分的普通琼脂平板上,每滴100uL,每个稀释度平行3滴。经37℃24h培养后分别计数大肠杆菌菌落数。2结果(1)乳酸菌和大肠杆菌同时接种,乳酸菌对大肠杆菌的拮抗作用结果见图1和图2。图1同时接种乳酸菌对大肠杆菌1701拮抗结果图2同时接种乳酸菌对大肠杆菌TM128拮抗结果由图1、2可以看出,无论是试验组还是对照组,1701株与TM128在前24h都处于增殖期,试验组在24h后,细菌数开始下降,而对照组,则在48h后,开始出现下降,但是试验组明显下降的更快。乳酸菌和大肠杆菌培养96h后,大肠杆菌全部被抑杀,对照组培养120h后,大
6、肠杆菌仍有存活。复合菌表现出比单一菌更强的拮抗能力。(2)乳酸菌培养24h后接种大肠杆菌,乳酸菌对大肠杆菌的拮抗作用结果见图3和图4。图3乳酸菌培养24h后接种大肠杆菌1701的拮抗结果图4乳酸菌培养24h后接种大肠杆菌TM128的拮抗结果结果表明,当乳酸菌先培养24h,然后接种大肠杆菌共培养时无论是试验组还是对照组在前24h,大肠杆菌仍然处于增殖期,但是试验组大肠杆菌的增殖幅度明显小于同时间等量接种结果,说明了乳酸菌提前接种具有良好的拮抗效果。(3)大肠杆菌先培养24h后,再接种乳酸菌对大肠杆菌的拮抗作用见图5和图6.图5大肠杆菌1701培养24h后
7、接种乳酸菌的拮抗结果图6大肠杆菌TM128培养24h后接种乳酸菌的拮抗结果图5、6可以看出,当大肠杆菌先培养24h,然后接种乳酸菌共培养48h后,大肠杆菌的仍得到很好的抑制,120h后,大肠杆菌可以完全被抑杀。3结论与讨论本试验中,3株乳酸菌对大肠杆菌1701、TM128株的生长增殖的拮抗作用,均显示了抑制效果。所得的结果可归纳为以下几点:①无论是禽致病性大肠杆菌1701,还是猪致病性大肠杆菌TM128,在与包括L.a、L.l和S.l在内的乳酸菌混合培养时,大肠杆菌的生长增殖均受到抑制,S.l对大肠杆菌的抑制效果最为明显。这可能与S.l的生长增殖速度较
8、其它两株菌快有关,生长增殖速度越快其培养基pH下降速度越快,培养基的pH降低越明显,则抑制效果
