病理学观察小鼠原发性干燥复合症模拟的眼表体征及发病机制研究

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1、病理学观察C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠原发性干燥复合症模拟的眼表体征及发病机制研究关键词：干燥综合征 干眼 C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠 炎症 组织病理学 第一章前言  干燥综合征(sjögrensyndrome，SS)是临床常见的自身免疫性疾病，根据是否伴有其他组织器官受累，可分为原发性干燥综合征和继发性干燥综合征，其主要病理改变是淋巴细胞浸润泪腺和涎腺，引起眼干和口干。干燥综合征属于水样液缺乏型干眼。 近年来，研究者设计了多种动物模型探讨干眼的发病机制，包括通过干燥环境应激、泪腺切除、基因敲除、东莨菪碱注射等

2、方法，诱导动物产生干眼病。研究发现：炎症和高渗透压是干眼发生发展的核心因素。干眼小鼠及干眼患者的泪液、眼表组织中炎性因子表达明显增多，包括Th1细胞(Thelpercell1)、Th2细胞(Thelpercell2)及Th17细胞(Thelpercell17)相关的细胞因子。临床研究亦发现，局部抗炎药物治疗可以改善干眼患者的眼部不适症状，明显提高患者生活质量。同时，调节性T细胞(regulatoryTcell,Treg)的数量减少和(或)抑制效应性T细胞增殖能力的下降可能参与了干眼的发生发展。尽管上述动物模型能够模拟出泪液分泌减少、角膜上皮脱落

3、及结膜杯状细胞减少等干眼体征，但是制作程序复杂、耗时长及不稳定，故难以模拟人干眼缓慢发病、逐渐加重、反复发生的临床特点。 非肥胖型糖尿病(Nod-obesitydiabetes，NOD)小鼠是人自身免疫性糖尿病模型小鼠。研究发现，该小鼠染色体上存在19个糖尿病易感基因位点参与糖尿病发病，而其中的2个染色体位点即Idd3(位于3号染色体上)和Idd5(位于1号染色体上)为干燥综合征易感基因位点。Cha等将NOD小鼠与C57BL/6J小鼠(对干眼不易感)先相互杂交后，再近交多代，得到只含有Idd3和Idd5两个疾病易感基因位点的小鼠，即C57BL/

4、6.NOD-Aec1Aec2小鼠。.........................1.2组织病理学变化和干眼的发生机制Nguyen等通过免疫组化染色和实时定量聚合酶链反应(real-timequantitativepolymerasechainreaction,RT-PCR)的研究方法，发现该小鼠涎腺在出生后第4周龄、第8周龄时与正常小鼠无显著差异，至第12周龄时开始发生涎腺炎，伴随炎症因子白介素-17(Interleukin17,IL-17)、白介素-23(Interleukin,IL-23)等表达增加；至第16周龄时涎腺组织中淋巴细胞浸润

5、及炎性因子表达至高峰，伴随涎腺腺体结构破坏和唾液分泌减少。由此可见，C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠可以自发地产生涎腺炎，但是其能否自发地产生泪液分泌减少、结膜杯状细胞数目减少及角膜上皮表面微绒毛密度降低等干眼改变，目前尚未见系统报道。 我们拟从以下三个方面进行研究： 1.采用空腹血糖值检测、泪液分泌试验I(SchirmerTestI,SIt)及眼表染色的方法，观察C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠的眼表体征变化； 2.采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,H&E)染色、过碘酸-希夫(periodic ac

6、id-schiff,PAS)染色及扫描电镜(scanelectronmicroscopy,SEM)检查方法,检测中央角膜上皮厚度及结膜杯状细胞数目，观察小鼠泪腺、角膜上皮细胞表面的组织病理学变化；3.采用免疫组化染色(immunohistochemistry,IHC)及半定量逆转录聚合酶链反应(semi-quantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)技术，检测小鼠泪腺中白介素-17(interleukin-17,IL-17)及叉头框蛋白3(forkheadboxpr

7、otein3,Foxp3+)的相对表达变化。 通过上述研究，初步明确C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠的眼表体征、组织病理学变化和干眼的发生机制。免疫组化染色和RT-PCR检测均发现，随着周龄增加，C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠泪腺组织中IL-17和Foxp3+阳性表达均逐渐增多(P<0.05)，且均较同龄C57BL/6J小鼠显著增多(P<0.05)。而对照组小鼠泪腺中IL-17和Foxp3+的相对表达无显著变化(P>0.05)。 ..............................第二章  C57BL/6.NO

8、D-Aec1Aec2小鼠的眼表体征观察  本部分实验旨在观察该小鼠眼表体征随周龄的变化特点及明确是否存在干眼。干眼(DryEye)是眼科最常见的眼表疾