ubm材料上的laminin蛋白促进负载骨髓间充质干细胞增殖和平滑肌分化

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1、UBM材料上的Laminin蛋白促进负载骨髓间充质干细胞增殖和平滑肌分化魏桂枝1，刘晶霞1，徐萍萍1，倪兵2，刘禄斌3，梁志清1＊基金项目：国家自然科学基金资助项目（81270683）SupportedbyNationalNatureScienceFoundationofChina(81270683)作者简介：魏桂枝，第三军医大学西南医院妇产科，女，硕士学位，在读，主要研究领域:女性盆底功能障碍基础与临床，电话：13883331941，Email:879723646@qq.com通讯作者：梁志清，电话：(023)68

2、754409，Email:zhiq.lzliang@gmail.com收稿日期：修回日期：第三军医大学西南医院妇产科；2第三军医大学基础部全军免疫所；3重庆市妇幼保健医院妇产科[摘要]目的探讨猪膀胱细胞外基质（urinarybladdermatrixUBM）上的Laminin蛋白对负载大鼠骨髓间充质干细胞（BoneMarrowMesenchymalStemCellsBMSCs）增殖和向平滑肌分化的影响。方法综合采用机械分离法、酶消化法法、化学去污法及冷冻干燥法等方法对新鲜猪膀胱进行脱细胞处理，采用蛋白与支架共孵育得到

3、猪膀胱脱细胞材料。通过HE、Masson染色及扫描电镜对材料进行组织形态学观察。而后通过蛋白与支架孵育，制备出Laminin+UBM及Anti-Laminin+UBM复合支架。采用贴壁法培养BMSCs，流式细胞学鉴定BMSCs。采用贴壁法培养BMSCs，通过流式细胞学鉴定BMSCs，然后将BMSCs进行体外培养、扩增后接种到采用P3代BMSCs，分别接种于UBM+Laminin、UBM及UBM+Anti-Laminin及UBM上，UBM作为对照组。最后通过使用CCK8检测、HE染色观察及免疫组化鉴定等方法检测Lami

4、nin蛋白对BMSCs增殖、迁移和、分化的影响情况。结果流式鉴定BMSCsCD29阳性表达率96.558%,CD31阳性表达率4.56%，CD34阳性率为3.30%。三种材料均能够支持BMSCs生长，且随共孵育时间的延长，CCK8检测表明三种材料均能够支持BMSCs生长，且随时间的延长，CCK8值均逐渐升高，其中。在接种的第9天，接种材料的细胞呈现明显的递增趋势，尤其是UBM+Laminin复合材料组细胞增殖率最高（P<0.01）CCK8检测值最高。HE染色表明:UBM+Laminin试验组的细胞接种第3三组材料均能

5、支持细胞在其表面生长，接种第3天可以看到UBM+Laminin形成细胞粘附层，随着时间延长，部分细胞并向深部迁移，接种第14天可以部分细胞可以到达材料致密层；UBM组第7天仅少许细胞向深层迁移，第14天未达基底层，但，而UBM+Anti-Laminin组无明显迁移组仅在支架表层生长。免疫组化检测a-SMA在显示UBM+Laminin组细胞呈阳性表达，UBM组细胞弱阳性，表达呈阳性，其余两组均呈UBM+Anti-Laminin组细胞呈阴性。结论UBM材料上Laminin蛋白能促进负载BMSCs增殖、迁移、并有诱导其向平

6、滑肌方向分化的作用。[关键词]：脱细胞膀胱；骨髓间充质干细胞；Laminin蛋白；增殖；分化；[中图法分类号]R318.08;R318.01;R312.2[文献标志码]AThelamininonurinarybladdermatrixpromotestheproliferationofbonemarrowmesenchymalstemcellandthedifferentionofbonemarrowmesenchymalstem13cellBMSCsintosmoothmusclecellGuizhiWei1,Ji

7、ngxiaLiu1,PingpingXu1,NiBing2,LubinLiu3,ZhiqingLiang1,*1DepartmentofObstericsandGynecology,SouthwestHospital;theThirdMilitaryMedicalUniversity；2InstituteofImmunology,theThirdMilitaryMedicalUniversity;3DepartmentofObstericsandGynecology,MaternalandChildHealthHos

8、pital;Chongqing，400038，China［Abstract］ObjectiveToinvestigatethelamininonpigbladderextracellularmatrixmaterial(urinarybladdermatrix(UBM),modulatesbonemarrowmesenchymalstemcel