细菌的常用染色技术

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1、细菌的常用染色技术简单染色法：利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。例如番红。1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。2．干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。3．固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液)，染l～2min。5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。6．干燥7．镜检复染色：利用用两种以上染料对细菌进行染色。例如革兰氏染色法。革

2、兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，需要碱性染料（basicdye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorisingagent）和复染液（counterstain）。　　碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystalviolet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色

3、剂常用95%的酒精（ethanol）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，而且将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液为番红。1.载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。2.草酸铵结晶紫染1分钟。3.自来水冲洗，去掉浮色。4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。5.用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色

4、。6.用番红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。细菌的染色及形态观察一、目的要求1、了解细菌染色的基本原理。2、掌握细菌的简单染、革兰氏染色及其他染色方法。3、观察和识别细菌的形态及细菌细胞的特殊结构。二、实验说明细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下特别是在油浸物镜下几乎与背景无反差，很难看清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的细菌及其结构。用于细菌染色的染色剂是苯环上含有发色基团和助色基团的化合物。发色基团使化合物本

5、身具有染色之能力，助色基团有电离特性，可以于被染物结合，使被染物着色。染色剂有三种：酸性染色剂（电离后分子带负电荷）；碱性染色剂（电离后分子带电荷）；复合染色剂（在电离后分子不带电荷，故也称为中性染色剂）。酸性染色剂主要用于染细胞质；碱性染色剂主要用于染核和异染颗粒等细胞结构；复合染色剂主要用来染螺旋体和立克次氏体。三、实验材料1、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸。2、酒精灯、接种环、载玻片。3、石炭酸复红染色液、革兰氏染色液、荚膜染色液、鞭毛染色液（配方见附录）。四、方法步骤（一）简单染色法步骤：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥镜检。1、涂

6、片在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水，以无菌操作法，从斜面上挑取少量菌种，在载玻片上和水混合后，涂成一均匀薄层。2、干燥固定涂片让其在空气中自然干燥，有时为使其干燥得快点，也可在酒精灯上加温，但勿贤紧靠火焰。3、固定待涂片干燥徨，手持载玻片一端，有菌膜的一面向上，在酒精灯火焰上通过几次（用手背触载玻片背面，以不烫手为宜），待冷却后，再加染料。4、染色玻片置于水平位置。加石炭酸复红液于菌膜部位。染1-2min。5、水洗倾去染液，斜置玻片，用很细水流的自来水冲洗（切勿使水流直接冲刷在菌膜处），直至洗下水呈无色为止。6、干燥自然干燥或用吸水纸吸干。7、

7、镜检。（二）革兰氏染色法步骤：涂片→干燥→固定→结晶紫染色→水洗→吸干→95%酒精脱色→水洗→吸干→蕃红复染→水洗→干燥→镜检。1、涂片同简单染色法2、干燥同简单染色法。3、固定同简单染色法。4、用草酸结晶紫染色1min后水洗。5、加碘液媒染1min。6、水洗。7、用95%酒精脱色，直至流下的酒精不呈紫色即停止（大约半分钟）立即水洗。８、复染　　滴加蕃红染液复染1min。９、水洗。10、干燥。11、镜检。（三）特殊染色法1、芽孢染色法芽孢壁较厚，透性低，着色和脱色均较困难，因此，芽孢染色需加热，并用着色力强的染料。步骤：涂片→固定→孔雀绿染色

8、→水洗→干燥→观察。1、涂片取一载片，将枯草杆菌以无菌操作涂片。2、干燥同简单染色法。3、固定同简单染色法。4、加孔雀绿染液于涂片上，在火焰上加热直至有蒸气时开始计