欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:37785695
大小:41.50 KB
页数:6页
时间:2019-05-31
《细菌染色技术总结》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、细菌染色技术(2010-11-2222:29:46)目的要求初步掌握细菌涂片制作,单染色法及革兰染色法等染色技术。实验内容1.细菌染色一般程序涂片干燥固定初染(媒染)脱色复染(1)涂片临床标本或液体培养物可直接涂抹于洁净的载玻片上,固体培养的细菌先在玻璃片上滴一滴生理盐水,然后取菌少许在盐水中磨匀,呈轻度混浊。涂好的菌膜大小一般以1cm2左右为宜。(2)干燥涂片最好在室温下自然干燥,或将标本面向上,置于酒精灯火焰高处慢慢烘干,切不可在火焰上烧干。(3)固定细菌的固定常用火焰加热法,即将上述已干的涂片在火焰中迅速通过3~5次
2、,温度以手能摸时热而不烫为度。目的在于杀死细菌,凝固细胞质,改变细菌对染料的通透性。(4)初染不同的染色方法,所用染液也不同。染液以覆盖菌膜为度。(5)媒染通过媒染可增加染料和被染物质的亲和力。媒染剂还可用于固定之后,亦可含在固定液或染液中。(6)脱色此步骤主要目的是观察细菌与染料间结合的稳定程度,作为鉴别染色之用。(7)复染细菌初染色被脱色后常以复染液复染,便于观察。复染液的颜色与初染液有明显不同。2.常用染料原液配制一般制备100ml纯酒精饱和溶液所需染料量:美兰2g~5g;结晶紫7g~14g;碱性复红3g~7g。3.
3、常用的染色方法(1)单染色法即用一种染料染色的方法。常用吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液。1)染液①吕氏美兰液美兰酒精饱和液30ml+0.01%KOH溶液70ml即成。②稀释石炭酸复红液碱性复红酒精饱和液10ml+5%石炭酸溶液90ml,然后用蒸馏水作10倍稀释即成。2)菌种大肠埃希菌普通斜面培养物。3)染色方法于已做好的涂片上滴加吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液,染色1min,以水冲洗至无颜色流下为止,自然干燥或以远火烘干后镜检。4)结果以美兰染色者菌体呈现兰色;以稀释石炭酸复红染色的菌体呈现红色。(2)革兰染色法1)原理细菌被
4、结晶紫着色后,再经媒染剂处理,染成深紫色或紫黑色。如被酒精脱去颜色,经复红复染成红色,称为革兰阴性菌;如不被酒精脱色,则仍为紫黑色,称为革兰阳性菌。革兰染色的原理尚未完全明了,主要有三种学说:①等电点学说革兰阳性菌的等电点低(pH2~3),革兰阴性菌等电点较高(pH4~5),一般染色液pH值为7.0左右,故电离后阳性菌所带阴电荷比阴性菌多,因此,摄取带阳电荷的染料(如结晶紫)多且不易脱色。②通透性学说革兰阳性菌细胞壁的通透性比阴性菌小,脱色剂较易通过革兰阴性菌的细胞壁,将染料溶解洗出,故易脱色;阳性菌的细胞壁通透性低,故不
5、易脱色。③化学学说革兰阳性菌细胞内含有某种特殊化学成分,一般认为是核糖核酸镁盐与多糖的复合物,它能和染料-媒染剂互相结合,使已着色的细菌不易脱色;革兰阴性菌体含核糖核酸镁盐复合物较少,易被脱色。2)染液①结晶紫染液取结晶紫饱和溶液20ml+1%草酸铵水溶液80ml混合过滤。②卢戈碘液取碘化钾2ml以10ml蒸馏水充分溶解,然后加碘1g待完全溶解后加蒸馏水至300ml。③脱色剂95%乙醇。④稀释石炭酸复红同单染色法。3)菌种大肠埃希菌和葡萄球菌混合菌液。4)方法①初染将结晶紫染液2~3滴加于制好的涂片上,染色1min,水洗;
6、②媒染加卢氏碘液2~3滴染色1min,水洗;③脱色95%乙醇脱色0.5min(无紫色脱落为止),水洗;④复染加稀释石炭酸复红数滴,染色1min,水洗干后镜检。5)结果革兰阳性菌染成紫色,革兰阴性菌染成红色。6)注意事项①涂片不宜过厚,否则脱色受影响,使革兰阴性菌染成革兰阳性菌,造成错误鉴定。②为防止染液蒸发而改变浓度,碘液的颜色变淡应弃去。③涂片积水过多会改变染液浓度,影响染色效果,故每次水洗后应将玻片甩干。④注意细菌的菌龄,一般以18h~24h左右培养物效果最好,菌龄过长影响细菌染色性。(3)萋-纳抗酸染色法(ziehl
7、—neelsen):主要用于结核杆菌和麻风杆菌检查。1)染液①石炭酸复红染液取碱性复红酒精饱和液10ml+5%石炭酸水溶液90ml混合。②脱色剂3%盐酸酒精。③复染剂吕氏美兰染液,同单染色法。2)菌种卡介苗和表皮葡萄球菌混合液。3)方法①初染在已固定的涂片上滴加石炭酸复红染液,远火徐徐加热至有蒸汽冒出,但切不可沸腾,并随时添加染色液,染色3min~5min,冷却后水洗。②脱色滴加3%盐酸酒精脱色至无红色流下为止,一般为2min。③复染水洗后用吕氏美兰复染0.5min~1min,水洗干后镜检。4)结果抗酸菌染成红色,非抗酸菌
8、染成蓝色。5)注意事项①加热时火切勿过大,防止染液沸腾。②每张玻片只允许放一份标本,以免阴阳结果混淆。③用过的玻片要彻底洗干净,防止抗酸菌留在玻片上。④切勿使用染色缸,印干的滤纸只能一片一张,不得重复使用。⑤脱色时间宁长勿短,以免误诊。⑥为防止实验室感染,标本要高压灭菌后再制片。(4)潘本汉抗酸染色法(
此文档下载收益归作者所有