全自动血球仪sysmex xe-2100的试剂技术点评——红色荧光反应

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1、全自动血球仪Sysmex  XE-2100的试剂技术——红色荧光反应作者：Hideaki  Matsumoto（译自Sysmex  Journal  International）关键词        全自动血液分析仪    XE-2100  红色荧光聚次甲基染料荧光染料 绪论           在临床实验室测定领域，有多种染料用于病理学实验、血液形态学实验和尿液分析实验1)。大家熟知的染料包括用于病理学实验的苏木精和派若宁-Y，以及用吉姆萨染色的天青-B和伊红-Y。     我们Sysmex的产品也用到染料，如1988年上市的，世界上最早的商业用途全自动网织红分析仪R-1000T

2、M，就用了荧光染料碱性槐黄2)；全自动尿沉渣分析仪UF系列3)中应用了菲啶和羰花青；最近上市的XE-2100TM使用了聚次甲基染料，用来进行WBC四分类、网织红细胞测定、有核红细胞测定，该染料被红色半导体激光（波长为633nm）激发后发出660nm或更高波长的红色荧光4)。聚次甲基的特点概括如下。  光和颜色     在讨论染料之前，我们必须理解光的颜色和固体物质颜色的不同之处。三种基本的光是固体物质颜色彼此区别的基础。当白色光，如太阳光，用棱镜分光后，会出现七种颜色，按波长下降顺序依次是红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫。波长越短，能量越大。     在Griffith描述的图上，光的颜

3、色分为如图2所示。在该颜色环上，数字1-9代表各自的光谱颜色，而数字10即紫色代表红色和紫罗兰色的混合色，以某种颜色为中界，混合与其相邻的两种颜色，将会产生该种中界的颜色，混合红色和黄色产生橙色，相互面对的颜色是互补的，混合相互面对的颜色产生白色光。     三种基本的光是红色（R）、绿色（G）、蓝色（B）。当用放大镜观察电视机的阴极射线管或电脑显示器时，你会发现显示器表面由三种光组成，它们是R、G和B。在彩色电视上它们产生出各种颜色。     另一方面，固体物质的三种主要颜色是红紫色（M）、黄色（Y）和蓝绿色（C）。混合这些颜色产生黑（灰）色。值得注意的是光和固体物质产生不同的红

4、色或蓝色色调。     碱性槐黄看上去是黄色，原因是吸收了蓝光。染料的水溶液吸收氩激光（488nm，蓝色）后显示黄色，而吸收氦氖激光或红色半导体激光（633nm，红色）显蓝色光。当选择氩激光作为光源时，对应的染料为黄色或橙色，当用红色半导体激光作为光源时，选择蓝色染料，如XE-2100中用的就是蓝色染料。染料的分类和结构     很多染料都有多种名称，包括习惯用语，和以开发或制造者命名等。这样就给使用染料的人造成混淆。当前，正大力推广染料在颜色索引5)中的命名。根据染料的特征，给出了颜色索引的一般名称，如碱性橙14（吖啶橙）、酸性红87（曙红-Y）。另一方面，根据结构式，给出了颜色

5、索引数字，从10000亚硝基团到77999无机颜料，如碱性槐黄被命名为C.I.41000和碱性黄2。可是还有许多没有被编入的染料，如用于彩色照片、彩色复印、彩色透明结晶显示等等。用于XE-2100的聚次甲基碱性染料。  荧光和荧光染料     基态的荧光染料被吸收的光激发，当由激发态返回基态时释放出荧光，其中有比吸收波长更长的荧光6,7)。当使用荧光染料时，我们可以使用尽可能短波长的光源，因为这样可以获得更高的光能和更多的有效荧光。然而有许多问题伴随光源产生。汞灯和卤素灯的使用寿命最多几百小时（氩和氦氖激光可达到几千小时），而且光源的体积很大。     另一方面，在长期使用的仪器上

6、配置红色半导体激光光源是最好的。因为该光源体积很小，直径为9mm，高度为5mm，而且使用寿命超过几千小时。我们1987年上市的免疫分析仪PAMIA-10TM（仅在日本销售）装备的是780nm波长8)的红色半导体激光；1995年上市的多参数分析仪SF-3000TM装备了650nm波长9)的红色半导体激光光源。这些仪器用散射光作为检测手段，而XE-2100使用红色荧光、前向散射光、侧向散射光作为检测手段，这些光束是由于用633nm波长的红色半导体激光照射被聚次甲基染料染色的细胞产生的。  聚次甲基染的特征     聚次甲基染料作为一种适用于现代工业的染料10)，广泛地用作红外吸收染料、

7、染料激光11)、LB膜（单分子膜，用于生产CD盘）、彩色胶片感光剂，但很少用作织品染料。聚次甲基的结构特征是结合一个杂环核（环上含有氮、硫、氧）和一个次甲基链（-CH2=）。该染料的另一个特征是理论上可以从杂环核的种类，侧链次甲基团长度来计算其吸收光的波长。正是由于这个原因，当产生了对于某一特定波长的高敏感彩色胶片，我们可以通过计算得到一种新合成的感光剂。有多种形式的杂环核用于聚次甲基染料，典型的例子。该图按杂环核的吸光度下降顺序排列。随着和杂环核相连的次甲基链（-C