细菌内毒素检查验证方案模板

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1、5/6验证文件********公司文件编号：********文件编号：**-**-**验证文件注射用********细菌内毒素检查法验证方案********公司5/6验证文件********公司文件编号：********目录1适用范围2目的3责任人4样品的来源及实验准备5内毒素限值的确定6具体验证步骤5.1鲎试剂灵敏度复核5.2干扰实验5.3供试品的内毒素检查7注射用********细菌内毒素检查方法5/6验证文件********公司文件编号：********1适用范围本验证方案适用于注射用********细菌内毒素检查法的验证。2目的建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评

2、价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。3责任人细菌内毒素检验员、QC主管。4样品的来源及实验准备4.1样品的来源、使用的主要试剂及实验条件和仪器注射用********注射用溶剂：批号20100201(规格：5ml)生产厂：********公司注射用********：批号20100201(规格：500mg)生产厂：********公司鲎试剂（标示灵敏度为：0.25EU/ml）批号：1110192规格：0.1ml生产厂：湛江安度斯生物有限公司鲎试剂（标示灵敏度为：0.5EU/ml）批号：1101050规格：0.1ml生产厂：湛江博康生物有限公司细菌内毒素检查用水

3、：批号：1201160规格：2ml/支生产厂：湛江安度斯生物有限公司细菌内毒素工作标准品：批号1004020效价：12EU/支生产单位：湛江安度斯生物有限公司实验用具:移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。其他玻璃实验用具：250℃1小时灭菌处理后使用。4.2实验准备4.2.1玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入烤箱。4.2.2除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻

4、璃器皿置烤箱后，将烤箱调至250℃，待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1小时。达到规定时间后，关断电源，待烤箱温度自然降至室温。在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用；如果玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下可在两周内使用，否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素。5内毒素限值的确定根据2010年版中国药典二部附录ⅪE细菌内毒素检查法中规定，细菌内毒素限值计算公式：L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，本品以EU/mg表示；K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂K=5EU/（kg．h）；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，人均体重按60kg计算

5、，人体表面积按1.62m2计算。注射时间若不足1小时，按1小时计算。本品以腺苷蛋氨酸计最大剂量为1000mg。L=5EU/（kg．h）*60kg*1h/1000mg=0.3EU/mg因此本品的细菌内毒素限值为0.3EU/mg。6具体验证步骤6.1鲎试剂灵敏度复核6.1.1实验操作6.1.1.1细菌内毒素标准溶液的制备取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。5/6验证文件********公司文件编号：********按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将

6、瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。然后进行稀释，制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2λ、1λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试对的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。6.1.1.2待复核鲎试剂的准备取规格为0.1ml/支的鲎试剂18支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。6.1.1.3加样将已充分溶解的待复核鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4列4支（管），1列2支（管）。4支（管）4列每列每支分别加入

7、0.1ml的2λ、λ、0.5λ、和0.25λ的内毒素标准溶液；另2支（管）加入0.1ml检查用水。6.1.1.4.加样结束后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，连同试管架放入37℃±1℃水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态，保温60±2分钟。6.1.1.5观察并记录结果。将试管架从水浴中轻轻取出，避免振动，将每管拿出缓缓倒转180°观察，管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；未形成凝胶或凝胶不能保持