影响凝胶色谱的分离的因素及其改进方法

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1、影响凝胶色谱的分离的因素及其改进方法吴承志张宁封树林孙振鹏（西南大学药学院，重庆，400716）摘要：凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。关键词：凝胶色谱；影响因素；填料；改进方法Influencefactorsoftheseparatio

2、ngelchromatographyandimprovingmethodsWuchengzhiZhangningFengshulingSunzhenpeng（CollegeofPharmaceuticalSciences,SouthwestUniversity,Chongqing400716）Abstract:Gelchromatographywasdevelopedintheearlysixtiesaquickandsimpleseparationtechniques,becausetheequipmentissimple,easytooperate,doesnotr

3、equireorganicsolvents,thepolymermaterialhasahighseparationefficiency.Alsoknownasgelpermeationchromatographymolecularexclusionchromatography.GPCismainlyusedforclassificationofpolymermolecularweightandmolecularweightdistributionofthetest.Hasnowbeenbiochemistry,molecularbiology,biologicalen

4、gineering,medicine,molecularimmunologyandrelatedfieldswidelyused,notonlyusedinscientificexperimentalresearch,andhasalargescaleforindustrialproduction.Keywords:gelchromatography;Influencingfactors;Packing;Improvementmethods凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物

5、质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱法主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水。用于有机溶剂中可溶的高聚物(聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相对分子质量分布分析及分离，常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布，同时根据所用凝胶填料不同，可分离油溶性和水溶性物质，分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。近年来，凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。化学结构不同但相对分子质量相近的物质，不

6、可能通过凝胶色谱法达到完全的分离纯化的目的。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对勿子质量分布测试。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。1凝胶色谱的分离效果的因素主要影响的因素有色谱柱填料的孔径大小及其粒径分布均匀性，其次是流动相、色谱柱高度、色谱柱的直径以及个人操作等。1.1首先，填料的孔径大小一定要合适，孔径太小，待测物不易流出，分析时间长，展宽严重；孔径太大则很可能导致组分分不开。在做凝胶色谱时，需要先大致估计下待分析物的分子量，然后选择合适的柱子，如

7、果不知道粒径，可先用大孔径的先试试，接着再用小粒径的以达到更高的精度。市售的柱子上都有该柱适用的分子量范围，一般选待测物分子量在色谱柱的最大分子量的20%-80%为宜。凝胶的颗粒粗细与分离效果有直接关系。一般来说，细颗粒分离效果好，但流速慢；而粗颗粒流速快，但会使区带扩散，使洗脱峰变平而宽。因此，如用细颗粒凝胶宜用大直径的层析柱，用粗颗粒时用小直径的层析柱。在实际操作中，要根据工作需要，选择适当的颗粒大小并调整流速。1.2其次是流动相。凝胶色谱中流动相的影响不像别的色谱（如反相or离子色谱）那么明显。其中主要影响的是流动相的流速，一般流速