一种佐剂新材料在嗜水气单胞菌灭活疫苗浸泡免疫异育银鲫

《一种佐剂新材料在嗜水气单胞菌灭活疫苗浸泡免疫异育银鲫》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、一种佐剂新材料在嗜水气单胞菌灭活疫苗浸泡免疫异育银鲫（以下同，全文统一）鲫中的应用效果任燕1，时云朵1,2,3，石存斌1收稿日期：20165-12-21修回日期：2017-04-10资助项目：广东省海洋渔业科技与产业发展专项（A201501C12）；现代农业产业技术体系建设专项资金（CARS-46）；国家科技支撑计划（2012BAD25B02）；广东省海洋渔业科技推广专项（A201501C12）*通信作者：石存斌，E-mail:shicunbin2006@163.com，吴淑勤11.中国水产科学研究院珠江水产研究所，广东省水产动物免疫技术重点实验室，农业部渔药

2、渔用药物创制重点实验室，广东广州5103802.上海海洋大学水产与生命学院，上海2013063.四川省水产学校，四川成都611730摘要：为研究蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷（Castoroilpolyethyleneglycolmonoesterglucoside，CPMG）在细菌灭活疫苗浸泡免疫中的佐剂作用，将CPMG和嗜水气单胞菌灭活疫苗联合施用，二次浸泡免疫异育银鲫后饲养在室内玻璃缸中，用实时荧光定量PCR检测加强免疫后2d、4d、7d、11d、14d和21d脾脏中IgM、IL-1β、C3、C-凝集素和溶菌酶的mRNA表达量，首次免疫30天后用同源菌株活菌

3、攻击试验鱼。同时，用含CPMG、山莨菪碱复合佐剂的灭活疫苗浸泡免疫异育银鲫鲫鱼一次后饲养在池塘网箱中，定期抽取血液检测血清抗体效价并用同源菌株活菌攻击人工感染试验鱼。结果显示，CPMG佐剂组和无佐剂组的5个免疫相关基因的相对表达量显著高于对照组（P<0.05），CPMG组IgM基因较无佐剂组更早表达，补体C3、C-凝集素以及溶菌酶的基因表达量更高或表达持续时间更长。血清抗体效价在免疫后2w达到160，6w达到峰值640，12w降低为40。室内玻璃缸中二次免疫30d后，CPMG组的平均相对保护率达到70.6%，复合佐剂组的达到88.2%，均显著高于无佐剂组的56

4、.0%（P<0.05）。池塘网箱中一次浸泡免疫30d、60d、和120d后，平均相对保护率分别为54.6%、44.0%、和12.5%。结果表明，CPMG与嗜水气单胞菌灭活疫苗共同浸泡免疫异育银鲫，增强了脾脏中IgM、IL-1β、C3、C-凝集素以及溶菌酶基因表达，提高了异育银鲫抗嗜水气单胞菌感染的能力。关键词：异育银鲫；蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷；山莨菪碱；灭活疫苗；浸泡免疫渔用疫苗，尤其是细菌灭活疫苗的浸泡免疫操作方便，适用于无鳞鱼、鱼苗等免疫。利用免疫佐剂、细胞渗透剂等材料，结合高渗浸泡、超声波处理等透皮方法，增强鱼体对抗原的摄入量，从而提高免疫效果是浸泡

5、免疫的发展方向和趋势[1]。基于此，开发应用高效、安全、使用方便、环境友好的的浸泡材料提高疫苗浸泡免疫效果，可大大推动渔用疫苗的应用，进而推动水产养殖业的健康发展。蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷（Castoroilpolyethyleneglycolmonoesterglucoside，CPMG）是由一种由可再生植物原料蓖麻油依次经酸化、酯化和糖苷化而合成的一种非离子表面活性剂，。CPMG可被具有良好的生物降解性，无毒，界面张力低，水溶性好，具有分散、乳化等作用，能使不溶于水的油类或不溶性抗原（如：细菌、病毒等）颗粒性物质在水溶液中分散更均匀和稳定（已申请专利）。

6、文献？可有哪些疫苗应用其作为佐剂？效果如何？。山莨菪碱的作用？那些应用？为什么用复合佐剂？本文评价CPMG新材料在嗜水气单胞菌灭活疫苗浸泡免疫异育银鲫中的应用效果，旨在寻找适合在渔业生产中应用的佐剂材料。1材料与方法1.1实验鱼和菌株异育银鲫（Carassiusauratusgibelio拉丁学名）购于广东省佛山市三水区某养殖场，体重体质量（8±1）g，体长（7.5±0.5）cm。实验前暂养2w周，观察摄食活动状态，确认健康后用于实验。实验期间池塘水温（26±3）℃，室内玻璃缸水温（26±1）℃。嗜水气单胞菌（Aeromonashydrophila拉丁学名）菌

7、株YYK090901为本研究室自行分离、鉴定并保藏的细菌，为本次实验的疫苗制备株和活菌攻击人工感染菌株。1.2主要试剂和仪器蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷CPMG由广州市瑞洋表面活性剂有限公司合成，TSB培养基购自广东环凯微生物科技有限公司，山莨菪碱为河南普瑞制药有限公司产品，PrimeScriptRTreagentKit和SYBRPremixExTaqII购自大连宝生物工程有限公司，TrizolReagent购自英潍捷基公司，鼠抗鲤科鱼IgM单抗为AquaticDiagnosticLtd.产品，HRP标记的羊抗鼠IgG为美国Jackson公司产品，其余试剂为进口

8、或国产分析纯。ABI7500荧光定量P