蚯蚓纤溶酶项目可行性分析报告

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1、蚯蚓纤溶酶项目的可行性报告汤波1.蚯蚓作为药用历史悠久蚯蚓是地球上种类众多，分布广泛的一类动物，我国由于历史悠久，地域辽阔，蚯蚓种类众多。到1999年为止，我国已登录有陆栖蚯蚓9科27属234种17亚种。蚯蚓俗称地龙，为常用中药，其药用历史已达数千年。蚯蚓药用首载《诗经》，我国现存最早的药学专著《神农本草经》和最完善的药学专著《本草纲目》均有记载。中医学认为，地龙咸寒，入肝脾肺经，具有清热熄风，平肝通络，平喘利尿之功能。现代药理研究认为地龙具有广泛的药理作用，包括：解热作用，镇热抗惊厥作用，平喘作用，降压作用，

2、抗心律失常，抗血栓，抗肿瘤作用，抗病毒作用，抗菌作用，杀精作用等等。除了作为中药外，蚯蚓还可以作为动物饲料和人的食品。根据研究，蚯蚓的营养成分非常齐全，蛋白质的含量高于一般食用肉类，含有人体所必需的8种氨基酸，还含9％－10％具有鲜味的谷氨酸，脂肪含量也比较低。在日本等东南亚国家，蚯蚓已经被开发成为一种新型的保健食品。目前全世界蚯蚓食品每年的贸易额高达20亿美元之多，而且每年以20％－30％的速度增加。蚯蚓还是改良土壤的行家，一般养殖蚯蚓的土地经过三年就可以变成高产丰产田；蚯蚓在保护环境和解决污染方面的应用也不

3、容低估。目前各国正积极研究利用蚯蚓来处理城市生活垃圾以及造纸、酿酒、屠宰、制革、食品加工等产生的费液及残渣。由于蚯蚓广泛应用于改良土壤、净化环境、兽用饲料、食品制药及日用化妆品等。最近几年，人工养殖蚯蚓、开发利用蚯蚓的热潮正席卷全球。2．蚯蚓纤溶酶的研究进展2.1纤溶酶的分离纯化蚯蚓提取物药用历史已达数千年，但由于科学技术的局限，人们并不清楚是什么有效成分在起作用。日本H.Mihara于1982年首次报道了从蚯蚓(Lumbricusrubellus)中提取出一种具有纤溶活性的酶，命名为蚓激酶（Lumbrinon

4、ase）。1991年，Mihara等再次报道其从L.rubellus中提取出一组具有强纤溶活性的蚓激酶成分，分子量为20～30kD，PI值为34,此酶具有热稳定性和在广泛的pH范围内保持活性，其对提取的蚓激酶纯化后获得生化性质不同的3个片段，此3个片段可进一步分离,片段I可分离为F-I-0，F-I-1和F-I-2，片段Ⅱ不能再分离，片段Ⅲ可分离为Ｆ-Ⅲ-1和Ｆ-Ⅲ-2。1993年Mihara所在的实验室对其分离到的六种蚓激酶成分进行理化性质鉴定，对经过凝胶过滤层析提纯后的酶蛋白进行SDSPAGE电泳,测定六种酶

5、分子的分子量分别为29662、29667、24664、24220、24196和23013（F-I-0，F-I-1，F-I-2，F-II，F-Ⅲ-1和F-Ⅲ-2）。各个酶分子对应的PI值分别为3.40，3.60，4.20，4.00，4.30和4.85。各个酶是一条单一的多肽链,全部酶蛋白都不含有糖成分。在pH2～11和最高不超过60℃的条件下稳定。对其底物特异性及酶活抑制的研究表明，此类酶为类碱性胰蛋白丝氨酸蛋白酶，其Ｎ端序列与类胰蛋白酶有局部相似性，从氨基酸测序、氨基酸组成分析和免疫原性分析结果来看，此六种酶是

6、来自至少4个基因的同工酶。随后国内外多个实验室也开展了蚓激酶的纯化研究，分离纯化技术日趋成熟。目前常用的分离步骤是:制备蚯蚓匀浆→盐析→凝胶层析→离子交换层析→ＨＰＬＣ或ＦＰＬＣ纯化。通过以上步骤可获得较高纯度的多个组分的蚯蚓纤溶酶，目前临床应用的蚯蚓纤溶酶大多采用这种方法和改进方法分离纯化的。1990年程牛亮等从双胸蚓(Lumbircidaebimastus)中分离出一种分子量为29KD的蚯蚓纤溶酶，由一条肽链组成，具有强烈的溶解纤维蛋白的作用，对家兔实验性血凝块也有明显的溶解作用。1993年，韩国Ryu等用

7、Mihara的方法从Lumbricusrubellus蚯蚓中提取出由六个成分组成的具有强纤溶活性的蚓激酶成分,此六种酶有不同的纤溶活性。1997年邢宝东等从Eiseniafetida蚯蚓匀浆中分离得到EFE-D，从其N端氨基酸序列及其它生化特性可以看出该酶与Nakajima等（1993）的F-II同源，该酶具有热稳定性。1998年克罗地亚的Hrzenjak等报道从Eiseniafetida蚓的匀浆中分离到一组含有糖脂蛋白的纤溶活性成分,并命名为Ｇ－90。此混合物包含二种有纤溶活性和抗凝活性的丝氨酸蛋白酶(PI和

8、PII)，PI分子量为，PII分子量为，两者都具有较高的纤溶活性和抗凝活性，但PI高于PII，PI可以自动降解成PII，两者除可以直接溶解纤维蛋白外，还能激活纤溶酶原从而间接起到纤溶作用。1998年赵晓瑜等利用亲和层析技术从Lumbricusrubellus蚯蚓中分离出至少九种纤溶酶组分，经分析，这些纤溶酶是一组非均一的糖蛋白，含糖量为5％，以中性己糖为主，这与Mihara等(1991