癌症治疗的新希望-dc-cik细胞的制备及在肿瘤治疗中的应用

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1、DC-CIK细胞的制备及在肿瘤治疗中的应用恶性肿瘤的治疗现状恶性肿瘤的多学科综合治疗恶性肿瘤各种治疗手段各具优势与不足肿瘤外科学肿瘤放射治疗学肿瘤化学治疗学肿瘤生物学治疗侧重点不同局部与全身早、中、晚期肿瘤免疫学治疗的优点可以有效地杀灭患者术后和放化疗后体内残存的肿瘤细胞，达到治疗肿瘤、预防复发与转移和最终根治肿瘤的目的。具有特异性强、适用性广、副作用轻等优点。肿瘤免疫学治疗非特异免疫刺激剂及细胞因子治疗：IL2、IL6、IL12、GM-CSF、TNFa、IFNa、IFNr等体内应用，装载有细胞因子基因的细胞治疗。治疗性疫苗：肿瘤抗原或多肽抗原疫苗、装载肿瘤抗原

2、基因的病毒疫苗、基因修饰的肿瘤细胞疫苗、APC细胞疫苗、抗独特性疫苗。Mab导向治疗：Mab、Mab-毒素、Mab-同位素、鼠-人单抗、人源单抗、双特异性抗体。过继性免疫细胞治疗：供者淋巴细胞输注、LAK、TIL、CIK、多种方法诱导的CTL、DC-CIK等。过继免疫疗法通过把在体外扩增的大量特异性效应细胞回输给患者后，产生直接杀伤肿瘤细胞的作用。DC-CIK培养及其应用CIK细胞：CytokineInducedKillerCellDC：DendriticCellCIK细胞特性分布：肝脏和外周血来源：CD3+CD56+T细胞和CD4-CD8+T细胞一群以CD3+

3、CD56+T为主的异质细胞包括α/βT细胞,γ/δT细胞与LAK、CD3AK细胞相比高效、广谱杀伤、非MHC限制DC与T细胞DC高表达MHC-Ⅰ类、Ⅱ类分子，MHC分子与其捕获加工的肿瘤抗原结合，形成肽-MHC分子复合物，递呈给T细胞，从而启动MHC-I类限制性CTL反应和MHC-Ⅱ类限制性的CD4+Thl反应；DC还通过其高表达的共刺激分子(B7-1、B7-2等)提供T细胞活化所必须的第二信号，启动了免疫应答。DC负载肿瘤抗原肿瘤杀伤作用DC在DC-CIK杀伤肿瘤细胞中的作用诱导抗原特异性CTL反应增加CIK细胞的扩增倍数增强CIK肿瘤杀伤效力MHC：抗原提呈

4、自分泌细胞因子：INF,IL-12等抑制CD4+CD25+调节T细胞生长CIK细胞的制备PBMNC(CS3000Plus)Ina3000mlBaxterbagSerumfreeculturemediumIFNγ第一天Il-2第二天CD3mAb第二天IL1α第二天14daysCS-3000采集PBMNCFicoll分离PBMC,洗2次1-2×106/ml接种至含无血清培养基的培养袋中，1000ml/袋，加入IFN-γ1000U/ml，放置37℃，5%的CO2孵箱中培养24h加入IL-1α100U/L，CD3单抗50ng/ml，重组人IL-2300U/L，继续培养，

5、每3天半量换液，并补加IL-2300U/ml。分别于第5，7，9天取细胞做细胞表型分析（FCM检测），细胞杀伤实验（MTT法）收集细胞，含0.5%白蛋白的生理盐水洗涤回输CD3主要促CIK细胞增殖，促IL-2自分泌，也提高CIK杀伤活性IFN-r/IL-1，上调细胞表面IL-2R表达，IFN-r先于IL-2加入，有效激活效应细胞，增强抗肿瘤活性DC的培养BMDCSerumfreeculturemediumIL-4,GM-CSFTNFα成熟DC7~9daysIL-4,GM-CSFTNFαPBDCTumorantigenDC-CIK共培养成熟DCCIK细胞+细胞污染

6、的防治由于细胞在培养过程中容易发生污染而又无法使用抗生素，所以采用genloci公司的MycoplasmaOUT™Prevention，非抗生素类，减少因为细胞污染带来的时间和经济上的损失。CIK细胞的增殖62.%84.7%89.5%28.2%43.1%52.3%CIK细胞对自体原代白血病细胞的杀伤作用CIK细胞对自体原代白血病细胞有明显杀伤作用，且其细胞毒作用随着效靶比的增加而进一步增强，在效靶比为20：1时，其中位杀伤率分别为51.33%,52.95%肿瘤细胞冻融物肿瘤细胞坏死物正常生长的肿瘤细胞无肿瘤细胞无DCDC-CIK对肿瘤杀伤作用DC-CIK对肝癌细

7、胞的杀伤活性*DC与CIK共培养后，CIK增殖能力和杀伤活性明显增强DC/CIK治疗结肠癌血源性肺转移的实验研究DC-CIK治疗乳腺癌CIK/DC-CIK治疗恶性血液病合并丙肝HCV-RNA转阴例数14/18治疗2疗程以上HCV-RNA持续阴性6/9ALT/AST/TBIL明显下降或正常例数10/10CIK治疗1例白血病合并丙肝后肝功的变化新技术RetroNectinactivatedkillercell（RAK）DC相关的技术RetroNectinactivatedkillercell（RAK）重组人纤维蛋白片段(RetfoNectin)可参与细胞的附着、伸展

8、、分化和增殖。该产品已注