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时间:2018-07-20
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1、金线莲组培快繁技术研究【摘要】 目的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体,开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究,并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好;不定芽增殖最佳培养基配方为MS(或B5)+BA3.0mg/L+NAA0.5~1.0mg/L,两个月增殖倍数达5.0以上;壮苗最适培养基为1/2MS+NAA3.0mg/L+6-BA0.5mg/L+香蕉提取物20%(或椰子汁20%);试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份+2~3mm粗砂2份(或1份)+木屑1份(或2份)
2、,3个月成活率均达100%,且生长良好。结论采用上述方法,能实现金线莲幼苗的快速繁殖。 【关键词】 金线莲;快速繁殖;增殖;生长;移栽 金线莲Anoectochilusroxburghii(wall.)lindl为兰科开唇兰属多年生草本,别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等,是我国传统珍贵药材,素有“金草”“神药”“乌人参”等美称,在民间应用范围较广,广泛应用于风湿性关节炎、高血压病、糖尿病、肾病等疑难杂症的治疗和强身健体、病后体虚恢复等方面,在浙江、福建、台湾等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材,特别在台湾省更是备受青睐,被称为“药中
3、之王”〔1,2〕。 金线莲种子微小,由未成熟的胚及数层种皮细胞构成,自然萌发率和繁殖率低,目前市场上货源主要来自于野生采挖,产品一直处于供不应求的状况。近年来,随着对其药效学和临床应用研究的深入,对金线莲药用价值的认识进一步提高,其市场货源紧缺的状况更为严峻,野生资源也不断遭到破坏性采挖,以致于处于濒临灭绝之地。本研究旨在采用组织培养技术,解决金线莲种苗来源,加快人工栽培,以保护金线莲野生资源、稳定市场供应。现将有关实验结果如下。 1 材料与方法 1.1 材料 无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野生种源,其它实验为继代培养
4、的不定芽及无根幼苗茎段。 1.2 无菌繁殖体系的建立 取生长健壮、无病虫害的植株,去叶后放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3~5min,然后用流水冲洗30min。在超静工作台前,用75%酒精湿润5~6s,放入0.1%的HgCl溶液灭菌12~13min,用无菌水冲洗5~6次。将消毒好的茎按上段(具茎尖)、中段和下段(匍匐茎段)切成长约1.5~2cm,带有1~2个节间的小段,分别接种于MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.4mg/L培养基上,pH5.6,蔗糖2.5%,琼脂0.7%。培养条件为:温度(25±2)℃,光照时间12h/d,光照
5、强度1500~2000lx。 1.3 不定芽诱导 1.3.1 基本培养基对不定芽诱导的影响 采用单因素实验,培养基选用MS(Murashige-Skoog)〔3〕,1/2MS(大量元素减半,其他成分不变),VW(Vacin&Went),B5(Gamborg·Miller&Ojima)和KC(KnudsonC)等5种,分别添加6-BA4.0mg/L,NAA1.0mg/L。 1.3.2 激素对不定芽诱导的影响 以MS为基本培养基,添加不同种类及浓度的细胞分裂素和生长素。 上述实验选取无菌健壮植株,切取长约1~1.5cm,
6、带有一个节间的茎中段,每处理接10个茎节,重复3次。培养期间定时观察不定芽生长情况,培养60d后统计不定芽数。其它条件同实验“1.2”项。 1.4 壮苗培养 1.4.1 激素对幼苗生长和发根的影响 以1/2MS为基本培养基,NAA设1~5mg/L5个处理,6-BA设0.5,1.0和1.5mg/L3个处理,共15个处理。 1.4.2 添加物对幼苗生长和发根的影响以1/2MS+NAA2.0mg/L+6-BA0.5mg/L为基本培养,考察马铃薯提取物、香蕉提取物、苹果提取物、椰子汁等4种天然有机物和活性炭对金线莲幼苗生长的影响。
7、 上述每种培养基均接入经增殖培养高约3cm,具3~4节间、有1~2片的无根幼苗,每处理接种接无根幼苗10株,重复3次。培养后每隔15d观察生长情况1次,至3个月考察每株净增加的叶片数、重量及发根数,并进行数理统计分析。 1.5 移栽 选苗高约6~8cm,茎基直径约2mm,丛生根有2~3条的试管苗,炼苗4d后,洗净附着在植株上的培养基,并晾干洗涤水后移人直径为15cm,装有不同基质的土盆中,考察不同基质对金线莲试管苗成活率的影响。移栽前,实验基质均用45%多菌灵可湿性粉剂800倍溶液浇透消毒。实验条件为遮荫度80%的荫棚,保
8、持空气相对湿度的80%~90%。如发现有病死植株,及时拔除。每处理5盆,每盆种5株,重复3次,移栽3个月后考察成活株数,并进行数理统计分析。 2 结果 2.1 无菌繁殖体系的建立 实验表明,外植体茎段的分化程度对诱导结果存在一定的影响。从表1
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