人同型半胱氨酸(hcy)elisa试剂盒说明书

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1、人同型半胱氨酸(Hcy)酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供研究使用检测范围：0.8nmol/ml–50nmol/ml最低检测限：0.2nmol/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人Hcy，且与其他相关蛋白无交叉反应。有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中Hcy含量。说明1.试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说

2、明书为准。4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。概述同型半胱氨酸Hcy又称高半胱氨酸，是一种含硫氨基酸，不属于组成蛋白质的20种氨基酸，体内不能合成，只能来源于蛋氨酸的分解代谢。Hcy是甲硫氨酸代谢形成的中间产物。，在体内由甲硫氨酸转甲基后生成，有两种途径。再甲基化途径：约有50%Hcy在蛋氨酸合成酶的作用下，以维生素B12为辅因子，以N5-甲基四氢叶酸为甲基供体，发生再甲基化，重新合成蛋氨酸。转硫途径：另外约50%的Hcy经转硫途径不可逆生成半胱氨酸和α酮丁酸，此过程需维生素B

3、6依赖的胱硫醚β合成酶和甲硫氨酸合成酶参与。Hcy合成和代谢途径及其相关的酶系统、叶酸、维生素B12和维生素B6的缺乏、MTHFR、甲硫氨酸合成酶(MS)、CBS的缺陷都可引起高同型半胱氨酸血症。实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗Hcy抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗Hcy抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Hcy呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

4、试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assayplate)：一块（96孔）。2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。3.样品稀释液(SampleDiluent)：1×20ml/瓶。4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120ul/瓶（1：100）。7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120ul/瓶（1：

5、100）。8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。9.浓洗涤液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10.终止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6.蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测

6、，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。1.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。

7、稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为50nmol/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释50nmol/ml，25nmol/ml，12.5nmol/ml，6.2nmol/ml，3.2nmol/ml，1.6nmol/ml，0.8nmol/ml.，样品稀释液直接作为标准浓度0nmol/ml，临用前15分钟内配制。如配制25nmol/mll标准品：取0.5ml（不要少于0

8、.5ml）50nmol/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制