蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、

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1、附件蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速检测（KJ201710）1　范围本方法规定了蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速检测方法。本方法适用于油菜、菠菜、芹菜、韭菜等蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速测定。酶抑制（率）法（分光光度法）2　原理在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率。3　试剂和材料除另有规

2、定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。3.1　试剂3.1.1　丙酮（CH3COCH3）。3.1.2　磷酸氢二钾（K2HPO4）。3.1.3　磷酸二氢钾（KH2PO4）。3.1.4　5,5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（C14H8N2O8S2）。3.1.5　碳酸氢钠（NaHCO3）。3.1.6　碘化乙酰硫代胆碱（ C7H16INOS）。3.1.7　pH8.0缓冲溶液：分别称取11.9g无水磷酸氢二钾及3.2g磷酸二氢钾，溶解于1000mL水中，混匀。3.1.8　显色剂：分别取160mg5,5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（DTNB）和15.6mg

3、碳酸氢钠，用20mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存。3.1.9　底物：取125mg碘化乙酰硫代胆碱，加15mL蒸馏水溶解，摇匀后置于4℃冰箱中保存备用。保存期不超过两周。3.1.10　乙酰胆碱酯酶：4℃冰箱中保存备用。—8——1.1　参考物质3种有机磷和2种氨基甲酸酯类农药参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥98%。表1有机磷和氨基甲酸酯类参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量序号中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量1克百威Carbofuran1563-66-2C12H15NO3221.252

4、灭多威Methomyl59669-26-0C5H10N2O2S162.233丙溴磷profenofos 41198-08-7C11H15BrClO3PS373.634敌敌畏Dichlorvos62-73-7C4H7Cl2O4P220.985敌百虫Dipterex52-68-6 C4H8Cl3O4P257.441.2　标准溶液的配制1.2.1　克百威、灭多威、敌敌畏、敌百虫标准储备液（1000μg/mL）：冷藏、避光、干燥条件下保存。1.2.2　丙溴磷标准储备液（100μg/mL）：冷藏、避光、干燥条件下保存。1.2.3　克百威、灭多威、敌敌畏、敌百虫标准中间液A（10

5、0μg/mL）：精密移取上述标准储备液（1000μg/mL）（3.3.1）各1mL，分别置于10mL容量瓶中，用丙酮（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为100 μg/mL的标准液A。1.2.4　克百威、灭多威、敌敌畏、敌百虫、丙溴磷标准中间液B（1μg/mL）：精密移取标准中间液A（100μg/mL）（3.3.3）及丙溴磷标准储备液（100μg/mL）（3.3.2）各1mL，分别置于100mL容量瓶中，用缓冲溶液（3.1.7）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 μg/mL的标准中间液B。2　仪器和设备2.1　恒温水浴锅。2.2　天平：感量为0.1g。2.3　分光光度

6、计或相应商品化测定仪。2.4　环境条件：温度15℃～35℃，湿度≤80%。3　分析步骤3.1　试样的提取3.1.1　整株提取法选取韭菜、芹菜有代表性的样品，擦去表面泥土，称取试样3g（精确至0.1g）置于表面皿中，加入10mL缓冲液（3.1.7），残缺面不得接触缓冲液，轻轻振摇50次，静置2min以上，取上清液—8——备用。1.1.1　整体测定法选取油菜、菠菜有代表性的样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，称取3g（精确至0.1g）放入离心管中，加入10mL缓冲溶液（3.1.7），振摇50次，静置2min以上，倒出提取液，静置3min～5min，待用。1.2　测

7、定步骤1.2.1　对照液的测定先于反应管中加入3mL缓冲溶液（3.1.7），再加入适量酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃水浴锅中放置15min。加入0.1mL底物摇匀，立即测定吸光度，3min后再测定一次，记录反应3min的吸光度值的变化∆A0。1.2.2　样品液的测定先于反应管中加入3mL提取液，其他操作与对照液操作（5.2.1）相同，记录反应3min的吸光度值的变化∆At。1.3　质控试验每次测定应同时进行空白试验和加标质控试验。1.3.1　空白试验称取空白试样，按照5.1和5.2步骤与样品同法操作。1.3.2　加标质控试验1.3.2.1　韭