行为金融与证券市场价格的反应-毕业论文

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1、分类号：UDC：密级：学号：416523713076南昌大学专业学位研究生学位论文沉默TRPV1基因对利多卡因所致细胞凋亡的影响及其机制EffectofTRPV1genesilenceoncellapoptosisinducedbylidocaineanditsmechanism琚幼婷培养单位（院、系）：南昌大学指导教师姓名、职称：胡衍辉主任医师专业学位种类：临床医学硕士论文答辩日期：2013.5.30答辩委员会主席：评阅人：年月日学位论文独创性声明一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我

2、所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、

3、汇编本学位论文。同时授权北京股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：论文题目年月日签字日期：年月日姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所E_mail专业备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）摘要摘要目的：构建针对人TRPV1基因的pSUPERretro-puroTRPV1逆转录病毒表达载体，感染U87-MG

4、细胞，观测其沉默TRPV1基因的效果。通过沉默TRPV1基因观测利多卡因处理后对U87-MG的细胞状态和凋亡情况的影响，以探讨利多卡因是否通过TRPV1产生神经毒性损伤。方法：利用Ambion在线设计软件设计针对人TRPV1基因的shRNA干扰序列，克隆到pSUPERretro-puro载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用磷酸钙法制备pSUPERretro-puroTRPV1逆转录病毒，将其感染到U87-MG细胞，经嘌呤酶素筛选阳性克隆后采用荧光定量PCR及Westernblotting法检测TRPV1表达。U87-MG的细胞分为空白

5、对照组、基因沉默组以及空载体组。对于每个组的细胞，我们利用流式细胞技术，研究利多卡因处理后不同时间点的细胞内钙离子浓度及线粒体膜电位情况。并通过MTT方法和流式细胞术，检测U87-MG细胞的活力和凋亡情况。结果：经DNA测序和酶切鉴定表明，pSUPERretro-puroTRPV1表达载体构建成功。pSUPERretro-puroTRPV1逆转录病毒感染U87-MG细胞后，细胞中TRPV1表达量明显降低。U87-MG细胞活力随着利多卡因处理浓度增高而降低。利多卡因处理各组细胞后随着时间增加，细胞内钙离子浓度逐渐上升。TRVP1基因沉默组的各时点钙离

6、子浓度显著比其他各组低（P<0.05）。利多卡因处理后，对照组U87-MG细胞的线粒体膜电位明显下降，而在TRVP1基因沉默组线粒体膜电位较高（P<0.05）。同时，流式细胞结果显示，利多卡因处理后，各组的细胞凋亡增高，而在TRVP1基因沉默组则明显低于对照组（P<0.05）。结论：成功构建了针对人TRPV1基因的pSUPERretro-puroTRPV1表达载体。pSUPERretro-puroTRPV1能有效下调TRPV1基因在U87-MG细胞中的表达。利多卡因可导致U87-MG细胞内钙离子浓度增高，线粒体膜电位降低和细胞凋I摘要亡增多。同时，

7、沉默TRPV1基因可降低利多卡因的这些损伤作用。这提示TRPV1与利多卡因神经毒性损伤机制有关。利多卡因可能通过激活TRPV1通道蛋白来增加细胞内钙离子浓度，降低线粒体膜电位并介导细胞凋亡。关键词：利多卡因；瞬态电压感受器阳离子通道；钙超载；凋亡IIAbstractABSTRACTObjective：TheaimistoconstructarecombinantretroviralvectorexpressingshRNAtargetingtohumanTRPV1geneandobserveitsdown-regulationeffectinthe

8、U87-MGcellline.BysilencingTRPV1gene,theeffectonstatusandapopt