中国农科院基因工程知识点综合

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1、中国农科院基因工程知识点综合Ti质粒(Tiplasmid)：存在于根瘤土壤杆菌细胞中的一种大型的DNA质粒，它诱发根瘤形成。Ti是英文tumor-inducing(肿瘤诱发)的略语。Ti质粒现已被改造成为植物基因工程中最重要的载体系列。一个酶单位（U）指：在理想的反应条件下，50ml反应体系中完全降解1mgDNA所需要的酶量。T-DNA农杆菌Ti质粒中的一段DNA序列，可以从农杆菌中转移并整合到植物基因组中，是植物分子生物学中广泛应用的遗传转化载体。DNA印迹杂交(DNAblotting)将通过凝胶电泳分离并做了变性处理的DNA片段，转移给硝酸纤维滤膜或尼龙膜，然后应用标记

2、的DNA或RNA探针进行杂交来显示这些DNA分子，这种实验技术叫做DNA印迹。由于最初它是由E.M.Southern发明的，因此又叫做Southern印迹，现在已逐步被更加快速的电印迹和真空印迹所取代。定向克隆(directionalclonging)将待克隆的核酸分子按一定的方向连接入载体的分子克隆方法。如克隆载体插入位置上设置两个不同的限制性内切酶位点，在外源DNA分子两端也放上相应的两个限制性酶切序列，经限制性酶消化后，所产生的DNA黏性末端分别互补结合，外源DNA就可定向插入载体。YAC(Yeastarificialchromosome)酵母人工染色体的简称，它是利

3、用酵母染色体的着丝粒和端粒元件，人工构成的能够在酵母细胞中增殖并能够转移哺乳动物细胞的遗传元件。这类载体能够将大至200-1000kb上的DNA遗传物质导入寄主细胞。用于构建基因组文库或物理图谱。ORF(openreadingframe)开发读码结构，亦叫可读框，简称ORF。由编码氨基酸的三联密码子组成的连续DNA序列，能翻译成蛋白质，由起始密码子开始，终止于终止密码子。限制性内切酶(Restrictionenonucleases)生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它可以将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自身的DNA却

4、无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子的内部进行的，故称为限制性内切酶，简称限制酶。核酶(Ribozyme)具有催化活性的RNA，即化学本质是核糖核酸(RNA)，却具有酶的催化功能。核酶的作用底物可以是不同的分子，可以是RNA，也可以是DNA。核酶的功能很多，有的能够切割RNA，有的能够切割DNA，有些还具有RNA连接酶、磷酸酶等活性。Ri质粒(RiPlasmid)它存在与发根土壤杆菌中，其T-DNA上的基因可诱发形成多毛状根。DNA克隆(DNAclonging)通过将外源DNA片段插入到克隆载体形成重组DNA群体，并转化到寄主细菌中进行

5、复制繁殖，以便从大分子的DNA片段或DNA片段混合物中，纯化分离出特定的DNA片段的实验过程叫做DNA克隆。kozak序列(kozaksequence)存在于真核生物mRNA的一段序列，其在翻译的起始中有重要作用。核糖体能够识别mRNA上的这段序列，并把它作为翻译起始位点。注意这段序列并不是ribosomalbindingsite(RBS)核糖体结合位点，而是帽子结构。位于起始密码子上游并与之紧邻的由5个核苷酸组成的特定序列，其中与ATG密码子相连的头3个最为保守，几乎都是腺嘌呤核苷酸。真核生物基因中起始密码子上下游的最佳序列为，-3位为嘌呤碱基；+4位为G，起始密码子AU

6、G中的A处于+1位。A/GCCAUGG被称为kozak序列或扫描序列。当在一种开放读码结构中存在着数个可能的起始密码子的情况下，其中只有具有强保守的kozak序列的才是真正的起始密码子。噬菌粒(phagemid或phasmid)系指由质粒载体和单链噬菌体载体结合而成的一类新型的大肠杆菌基因克隆载体系列。此载体具有分子量小、克隆能力大、可稳定遗传、即可制备单链DNA亦可制备双链DNA等优点。噬菌粒载体是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体。在细菌的细胞中出现有辅助噬菌体的情况下，可被诱导成单链DNA噬菌粒，能像M13-

7、DNA那样体外包装，并高效转染受体细胞；也能像质粒那样在受体细胞中自主复制，装载量比常规的M13系列要大很多；通过克隆双链DNA能获得同等长度的单一单链DNA，还可以作为体外转录载体。回收者载体：利用酵母的整合型质粒作载体，将染色体上发生天然突变的基因置换到质粒上，然后从酵母细胞中提取这种质粒，以达到分离和研究突变基因的目的。失控的质粒(runawayplasimid)也叫复制失控的质粒，指一些低拷贝的质粒，其复制控制是温度敏感型的，也就是说在不同的温度下，拷贝数会有显著的变化。基因组印迹(genomicimpri