细胞凝集试验实验讲义

《细胞凝集试验实验讲义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、细胞凝集反应一、实验目的了解细胞膜的结构与功能。二、实验原理细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。凝集素(lectin)是一类含糖(少数例外)的并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。三、实验用品1、土豆块茎2、显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支。3、PBS缓冲液NaCl7.2gNa2HPO41.48gKH2

2、PO40.43gH2O1000ml4、2％的红细胞四、实验步骤1、2％的红细胞的制备：取一定量的红细胞，用生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成2％红细胞液。2、称取去皮土豆块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸提液中含有可溶性淀粉土豆凝集素。3、用滴管吸取土豆凝集素和2％红细胞液各一滴，置于载玻片上，充分混匀，静置20min后，于倒置显微镜下观察血球凝集现象。4、以PBS液加2％血细胞液作对照实验。五、实验报告：简图表示血细胞凝集原理。细胞膜的渗透性一、实验目的了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。二、实验原理将红细胞

3、放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以水分进入细胞，引起溶血，溶质渗入速度不同，因此溶血时间也不同。三、实验材料和试剂1、器材：50ml小烧杯，10ml移液管，试管，试管架。2、材料：动物血液3、试剂：0.17mol/L氯化钠、0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸铵、0.17mol/L硝酸钠0.12mol/L草酸铵和0.12mol/L硫酸钠0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇和0.32mol/L丙酮四、实验方法1、动物血液的稀释：取1份血液，加入10

4、份0.17mol/L氯化钠溶液即可。2、低渗溶液：取试管一支，加入10ml蒸馏水，再加入1ml稀释的血液，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100％红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。3、红细胞的渗透性：取试管一支，加入0.17mol/L氯化钠溶液10ml，再加入1ml稀释的血液，并轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？为什么？取试管一支，加入0.17mol/L氯化铵溶液10ml，再加入1ml稀释的血液，并轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？若发生溶血，记下时间(自加入稀释血液到溶液变成红色透明澄清所需时间)。分别在另外几种溶液中进行同样

5、的实验。步骤同上。五、实验结果讨论与分析将观察倒的现象列入下表，对实验结果进行比较和分析。试管编号是否溶血时间结果分析1.10mlNaCl＋1ml稀释血液2.10mlNHCl＋1ml稀释血液3.10mlNHAc＋1ml稀释血液4.10mlNaNO3＋1ml稀释血液5.10ml草酸铵＋1ml稀释血液6.10mlNa2SO4＋1ml稀释血液7.10ml葡萄糖＋1ml稀释血液8.10ml甘油＋1ml稀释血液9.10ml乙醇＋1ml稀释血液10.10ml丙酮＋1ml稀释血液果蝇的饲养与形态观察果蝇简介果蝇是在世界各地常见的昆虫，属于昆虫纲，双翅目，果蝇科，果蝇属。果蝇属有3000多种，我国已

6、经发现800多种，遗传学研究中通常用的是黑腹果蝇。作为遗传学研究的材料，果蝇具有非常突出的优点，它形体小，生长周期迅速，繁殖率高，饲养方便，世代周期短，约12天就可繁殖一代，突变性状多，染色体数目少，基因组小，实验处理十分方便，容易重复实验，便于观察和分析。果蝇的遗传学研究广泛而深入，尤其在基因分离、连锁、互换等方面十分突出，为遗传学的发展作出了突出的贡献。目前果蝇仍然是遗传学、细胞生物学、分子生物学、发育生物学等研究中常用的模式动物。实验目的1.掌握果蝇的基本特征及鉴别雌雄果蝇的方法，熟悉常见突变型。2.了解果蝇生活周期特征及各阶段的形态变化。实验材料实验用品仪器设备：显微镜、指型

7、管、毛笔。药品与试剂：乙醚、玉米粉、酵母粉、蔗糖、丙酸。实验内容和步骤1.生活周期的观察果蝇的生活史：果蝇与家蝇是不同的种，是完全变态昆虫，其完整的生活周期可分为4个明显的时期，即卵、幼虫、蛹和成虫。用放大镜从培养瓶外即可观察到这四个时期，也可取出用立体解剖镜仔细观察。果蝇的生活周期长短与温度关系很密切，低温使生活周期延长，生活力减低，高于30℃使果蝇不育甚至死亡。果蝇培养的最适温度为20～25℃，25℃培养条件下果蝇从受精卵到成虫约10天，其中卵和幼虫期