红细胞凝集试验

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1、红细胞凝集试验血球凝集(HA)试验:有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验血球凝集抑制(HI)试验:病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验阿氏液（Alsever）：即红细胞保养液指红细胞凝集的现象。由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的红细胞凝集。（1）由病毒而引起的凝集：G．H．Hirst（1941）发现流感病毒能使鸡的红细胞发生凝集，其后又发现其它各种病毒也能引起同样的红细胞凝集反应。即红细胞表面存在着对各种

2、病毒的受体，病毒与受体结合，以红细胞为桥梁的结果而引起凝集。利用此反应可以进行病毒的定性和定量。另外，如果存在抗病毒的抗体时，则由病毒引起的凝集作用将被抑制，所以可用于抗病毒抗体的检出。（2）由抗体引起的凝集：（a）如果存在对红细胞表面决定基的抗体，则红细胞亦将凝集。可用于测定对抗红细胞的抗体的效价或鉴定人的血型。（b）在红细胞表面，如果人为地使之吸附或结合特定的抗原物质，则与该抗原相对应的抗体将引起红细胞凝集（被动凝集反应或间接凝集反应，psssivehe-magglntination）。　　血凝及血凝抑制

3、试验　　有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。 　　[目的要求]　　掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。　　[材料与试剂]　　1.96孔“U”形或“V”形微量反应板，50uL定

4、量移液器，滴头，微型振荡器。　　2.生理盐水，0.5%鸡红细胞悬液，新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。　　[实验内容及操作方法]　　（一）血球凝集(HA)试验 　　1.在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50uL生理盐水。　　2.于左侧第1孔加50uL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50uL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50uL；第12孔为红细胞对照。　　3.自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50uL，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1

5、）。　　表4-1 病毒血凝试验的操作方法（单位：uL）　　孔号123456789101112病毒稀释度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:10241:2048对照生理盐水505050505050505050505050病毒液50505050505050505050500.5%红细胞505050505050505050505050弃50结果观察+++++++++++++++++++++++++++++--4.结果判定：从静置后10min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即

6、可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100%凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。　　以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。　　(二) 血球凝集抑制(HI)试验　　1.根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。　　2.在96孔微量反应板上进行，用

7、固定病毒稀释血清的方法，自第1孔至第11孔各加50uL生理盐水。　　3.第1孔加被检鸡血清50uL，吹吸混合均匀，吸50uL至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，吸弃50uL，稀释度分别为：1:2、1:4、1:8……；第12孔加新城疫阳性血清50uL，作为血清对照。　　4.自第1孔至12孔各加50uL4个血凝单位的新城疫病毒液，其中第11孔为4单位新城疫病毒液对照，振荡混合均匀，置室温中作用10min。　　5.自第l孔至12孔各加0.5%鸡红细胞悬液50uL，振荡混合均匀，室温下静置后观察结果（表4-2）。　　表

8、4-2 病毒血凝抑制试验的操作方法（单位：mL）　　孔号123456789101112血清稀释度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:1024病毒对照血清对照生理盐水5050505050505050505050被检鸡血清50505050505050505050504单位病毒505050505050505050505050室温中静置10min0.5%红细胞5050