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1、双向电泳结合质谱初步分析蛇岛蝮蛇毒蛋白质组驰①刘淑清②#宗军卫①袁章利①孙明忠③3马吴玉群④(①大连医科大学临床医学系大连③大连医科大学基础医学院生物技术系李建立④孙立新④郑庆印⑤116044;②大连医科大学生化与分子生物学教研室大连116044;大连116044;④辽宁蛇岛老铁山自然保护区管理处大连116041;⑤凯斯西保留地大学医学院克利夫兰44106美国)摘要:采用荧光染料(Cy5)标记中国辽宁蛇岛蝮(Gloydiusshedaoensisshedaoensis,GSS)蛇毒(snakevenom,SV,GSS2SV)蛋白质
2、,获得了该蛇毒的双向十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DSDS2PAGE)图谱,经DeCyder软件分析,分辨出1000多个蛋白点,分子量范围在10～150ku间,等电点在4～7的蛋白质点占7818%。凝胶后染色(post2staining)采用蛋白荧光染料DeepPurple,选取的5个蛋白点经胶内酶解,产生的肽段经高效液相色谱2电喷雾串联质谱(highperformanceliquidchromatographyΠHPLC2electro2sprayionizationtandemmassspectrometryΠESI2M
3、SΠMS,HPLC2ESI2MSΠMS)进行序列测定,质谱数据经SequestBioworks软件分析,为蛇毒L2氨基酸氧化酶、金属蛋白酶、类凝血酶、纤溶酶原激活物和磷脂酶A2的同源蛋白。本研究采用的荧光标记2DSDS2PAGE结合HPLC2ESI2MSΠMS的技术适于高通量研究蛇毒蛋白组成。关键词:蛇岛蝮;蛇毒;双向电泳;高效液相色谱;电喷雾质谱中图分类号:Q956文献标识码:A文章编号:025023263(2009)04270208ProteomicAnalysisofGloydiusshedaoensisshedaoensi
4、sVenombyTwo2dimensionalElectrophoresisCombinedtoHighPerformanceLiquidChromatography2electro2sprayIonizationTandemMassSpectrometry:aPreliminaryStudyMAChi①LIUShu2Qing②#ZONGJun2Wei②YUANZhang2Li②SUNMing2Zhong③3WUYu2Qun④LIJian2Li④SUNLi2Xin④ZHENGQing2Yin⑤(①DepartmentofClini
5、cMedicine,DalianMedicalUniversity,Dalian116044;②DepartmentofBiochemistry&MolecularBiology,DalianMedicalUniversity,Dalian116044;③DepartmentofBiotechnology,DalianMedicalUniversity,Dalian116044;④AdministrativeDivisionoftheNationalSnakeIslandandLaotieshanMountainNaturalCo
6、nservation,Dalian116041,China;⑤CaseWesternReserveUniversityMedicalSchool,Cleveland,Ohio44106,USA)基金项目大连医科大学大学生科研活动资助项目,辽宁省自然科学基金项目(No.2008S077),大连科技厅资助项目(No.2008J22JH014)和辽宁省百千万人才工程资助项目(No.2008921069);3通讯作者,E2mail:mxs288@gmail.com;第一作者介绍马驰,男,临床本硕连读生;研究方向:蛇毒活性物质纯化表征;E2
7、mail:much258@gmail.com;#共同第一作者刘淑清,女,博士,副教授;研究方向:生物化学及分子生物学;E2mail:lsqsmz@gmail.com。收稿日期:2009201216,修回日期:2009204223Abstract:TheproteincomponentscontainedinthesnakevenomofGloydiusshedaoensisshedaoensis(GSS2SV)werelabeledwiththefluorescentdyeofCy51Then,thetwo2dimensional
8、sodiumdodecylsulfate2polyacrylamidegelelectrophoresis(2DSDS2PAGE)profileofGSS2SVproteomewasobtained.GelimageanalysisbyDeCyde
