微生物的生理生化试验

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1、微生物的生理生化试验微生物的生理生化试验不同的细菌分解利用糖类、脂肪类和蛋白质类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不同，通过检测微生物的不同代谢产物和代谢过程中不同的酶系统，达到鉴定细菌的目的。包括糖类代谢试验、蛋白质代谢试验、碳源和氮源利用试验、呼吸酶类试验以及其他酶类试验。一、糖类代谢试验糖类是作为碳源和氮源提供细菌合成菌体成分的必须原料，不同的细菌分解糖类的能力和代谢产物不同，可作为鉴定细菌的依据之一。一、糖类代谢试验1、糖类发酵试验不同细菌含发酵各种糖类的酶不同，分解糖类（糖醇类）的能力亦不同，根据分解不同糖类后产物的差异，来鉴定细菌。结果：若细菌分解

2、糖类产酸，使培养基中的指示剂显酸性反应，颜色发生变化，若产气可使培养基中的导管或者琼脂出现气泡，无变化则说明阴性。说明：指示剂：酚红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝（黄红）（黄紫）（黄蓝）部分糖类灭菌需防止高温破坏。一、糖类代谢试验1、单糖分解反应：葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖一、糖类代谢试验2、氧化-发酵试验（OF试验）细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有氧参加的称为氧化型，有氧无氧都可以分解葡萄糖的称为发酵型，不分解葡萄糖的称为产碱型。方法：穿刺两只斜面琼脂，一只滴加无菌液体石蜡，高度不少于1cm，35℃培养48小时。结果：两只均为黄色为发酵型，均不变为产碱型或不分

3、解塘型，不加石蜡的变黄而加石蜡未变黄为氧化型。一、糖类代谢试验2、氧化-发酵试验（OF试验）一、糖类代谢试验3、甲基红（MR）试验主要用于肠杆菌科内细菌的鉴别。方法：接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中35℃培养2-3天，滴加0.04%甲基红酒精溶液观察。原理以及结果：细菌分解葡萄糖过程中产生丙酮酸进一步代谢为酸类，使PH下降至4.5以下，加入甲基红出现红色（酸性）为阳性反应，黄色（碱性）为阴性反应。橘红色为弱阳性。一、糖类代谢试验3、甲基红（MR）试验一、糖类代谢试验4、V-P（Voges-Proskauer）试验目的：常与甲基红试验同时使用，前者阳性的细菌后者常为阴性，

4、反之亦然。可用于大肠杆菌和产气杆菌的区别。原理：一些细菌代谢产生的丙酮酸脱羧后生成的乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气氧化生成丁二酮，与蛋白胨的精氨酸的胍基反应生成红色化合物。结果：出现红色为阳性，不出现红色为阴性。4、V-P（Voges-Proskauer）试验一、糖类代谢试验一、糖类代谢试验5、β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）目的：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验阳性，而不发酵乳糖的细菌（如沙门氏菌）为阴性。原理：细菌迅速分解乳糖是有β-半乳糖苷渗透酶和β-半乳糖苷酶，但ONPG分子与乳糖相似且分子较小，故不需β-半乳糖苷渗透酶也可分解乳糖。结果：呈现黄色为阳

5、性反应，通常20-30min内显色注意：为提高阳性反应速度，需大量接种培养物。需要适当缓冲，过酸出现假阴性，过碱则出现假阳性。产黄色素细菌不宜做次试验，如必须做可离心后判定结果一、糖类代谢试验5、β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）二、蛋白质代谢试验不同细菌分解蛋白质能力不同，可利用不同氮源来合成菌体蛋白质，可通过检测加入蛋白质分解后的产物或PH变化来鉴定细菌。二、蛋白质代谢试验1、吲哚（indole）试验（又称靛基质试验）目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。原理：细菌分解蛋白胨中色氨酸生成的吲哚与试剂中的二甲氨基苯甲醛作用生成红色的玫瑰吲哚。方法：纯培养物接种蛋白胨水后3

6、5℃培养24-48h沿管壁徐徐加入Kovac氏试剂或欧氏试剂0.5ml观察。结果：两层液体交界处出现红色为阳性，无色为阴性。二、蛋白质代谢试验1、吲哚（indole）试验（又称靛基质试验）二、蛋白质代谢试验2、氨基酸脱羧酶试验目的：通过不同细菌对氨基酸之羧基的分解能力来鉴别细菌。原理：细菌产生的脱羧酶可脱掉氨基酸之羧基，生成胺和CO2，使培养基PH升高，指示剂显色。常用氨基酸有三种：a、赖氨酸：经过赖氨酸脱羧酶作用生成尸胺和CO2。b、鸟氨酸：经过鸟氨酸脱羧酶作用生成腐胺和CO2。c、精氨酸：经过精氨酸脱羧酶作用生成精胺和CO2。二、蛋白质代谢试验2、氨基酸脱羧酶试

7、验结果：检测培养基由黄色变紫色为阳性，黄色为阴性，对照（无氨基酸）为黄色。二、蛋白质代谢试验3、精氨酸双水解酶原理：精氨酸经过精氨酸双水解酶两次水解，产生鸟氨酸、两分子氨和一分子CO2。沙门氏菌分解精氨酸是由于精氨酸双水解酶，而大肠埃希氏菌则是由于精氨酸脱羧酶。结果：指示剂颜色转为碱性时为阳性。即酚红转为红色，溴甲酚紫转为紫色。二、蛋白质代谢试验4、苯丙氨酸脱氨酶试验目的：检测细菌的脱氨基能力。该试验主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。原理：细菌产生的苯丙氨酸脱氨酶使苯丙氨酸脱去氨基生成的苯丙酮酸和加入的FeCl3,螯合后出现绿色产物，随后绿色褪去。结果：将FeCl3试