液相色谱-串联质谱法同时测定猪尿中的22种违禁药物20121208

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1、液相色谱—串联质谱法同时测定猪尿中的22种违禁药物王旭峰张高奎杨建文卞愧王宗楠王立琦张桂君贺利民*（华南农业大学兽医学院兽医药理研究室，广州510642）摘要建立了液相色谱串联电喷雾质谱同时测定猪尿液中22种违禁药物的分析方法。猪尿样真空冷冻干燥处理，用10%甲醇水（0.1%甲酸）溶液复溶，AnpelMCX固相萃取小柱净化、富集。以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱，经CNWAthenaC-18色谱柱（150mm×2.1mm,5mm）分离，采用电喷雾电离，多反应监测正离子模式对22种药物进行定性和定量分

2、析。采用基质匹配标准溶液校正，各个药物的响应与其质量浓度在0.5~100mg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数(r)大于0.99；以3倍信噪比(S/N)和10倍S/N计算方法检出限和定量限，分别为0.5~4mg/L和1~10mg/L；在LOQ、10、20及50mg/L四个添加水平，猪尿中22种药物的平均回收率为50.2%~97.7%；日内相对标准偏差（RSD）和日间RSD分别为1.0%~8.6%和4.7%~17.9%。实验结果表明，该方法简单、灵敏、可靠，适用于猪尿β-受体激动剂类、激素类、硝基咪唑类和镇定类等

3、22种违禁药物残留的确证分析。关键词液相色谱-串联质谱；违禁药物；多残留检测；猪尿1引言在畜牧业生产中兽药、促生长剂的使用日益频繁，动物性食品中的兽药残留和食品安全问题成为消费者关注的焦点[1]。我国农业部2002年底颁布的235号公告[2]中明确规定禁止用于食品动物的药物31种（包括克伦特罗等β-受体激动剂类、激素类、硝基呋喃类、硝基咪唑类和镇定类等），限制使用（允许作治疗用，不得在动物食品中检出）的药物9种（氯丙嗪、赛拉嗪、安定、地美硝唑、甲硝唑、苯甲酸雌二醇、苯丙酸诺龙、丙酸睾酮及潮霉素B）。目前，对这些违

4、禁药物在动物食品中残留的分析检测和筛查需要采用数种分析方法[3~6]，既缺乏时效性也浪费大量人力、物力和财力。开展动物食品中违禁药物的高通量分析筛查方法研究具有重要意义。国外采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析检测动物食品[7~9]及环境水、土壤[10,11]中的多类药物残留检测的报道较多；国内，有采用LC-MS/MS分析检测畜禽肉、牛奶基质中3类20种兽药的检测和猪肉、猪肝、虾、牛奶和鸡蛋中6类76种兽药残留同时测定的报道[12,13]，但关于其它食品基质、饲料及尿液中多残留检测的报道较少。本研究针对

5、我国动物食品中违禁药物残留监测被动的局面，开展采用LC-MS/MS进行高通量禁用药物筛查，建立了猪尿中建立了猪尿中β-受体激动剂（西马特罗、沙丁胺醇、克伦特罗）、硝基咪唑类药物（甲硝唑、地美硝唑、洛硝达唑）、农药（双甲脒、克百威）、镇定类药物（赛拉嗪、氯丙嗪、安眠酮、地西泮）、激素类药物（群勃龙、诺龙、甲睾酮、丙酸诺龙、丙酸睾酮、醋酸甲孕酮）、孔雀石绿、隐形孔雀石绿、硝呋烯腙、氨苯砜等22违禁农兽药的多类多残留分析检测方法。方法简单、灵敏、可靠，各项技术指标满足实际样品中禁用药物残留检测要求。2实验部分2.1仪器

6、与试剂Agilent1200高效液相色谱系统（安捷伦公司）；API4000电喷雾-串联四级杆质谱仪（应用生物系统公司）；氮气吹干仪（美国Zymark公司）；固相萃取仪（Waters公司）；真空冷冻干燥机（德国ThyracontElektronicGmbH）。对照品（纯度>99%，中国兽医药品监察所，Sigma公司及Dr.EhrenstorferGmbH），甲醇、乙腈、甲酸及乙酸铵（色谱纯，美国FisherScientific公司），其它试剂为分析纯。猪尿试样由农业部畜禽产品质量监督检验测试中心(广州)提供，处理前

7、于-20℃冷冻保存。2.2实验方法2.2.1猪尿样品前处理量取1mL猪尿试样置于10mL离心管中，-20℃冷冻1h，转移至-80℃条件下真空冷冻干燥8h，残渣加入5mL10%甲醇水（含0.1%甲酸）溶液，超声5min溶解，离心后净化。用甲醇活化AnpelMCXSPE小柱，3mL水和2%甲酸水溶液平衡。将5mL复溶液全部过柱，依次用2%甲酸水溶液和10%甲醇水溶液淋洗，抽干后用3mL5%氨化甲醇洗脱。洗脱液于40℃水浴中吹干，加1mL10%甲醇水（含0.1%甲酸及10mmol/L乙酸铵）溶液超声溶解，过0.22mm

8、滤膜，上机检测。2.2.2基质匹配标准工作液各对照品储备液用甲醇稀释，配制成10mg/mL的中间混和标准溶液，再用10%甲醇水（含0.1%甲酸及10mmol/L乙酸铵）溶液稀释成5，10，20，50，100，200，500和1000mg/L的系列混合标准溶液。取100mL上述系列浓度的标准溶液与按221方法处理的空白猪尿液900mL涡旋，混匀，制得0.5，1，2，5，10