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时间:2018-07-18
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1、微生物学课程设计专业:生物技术姓名:符英康学号:1040521125从土样中分离纯化酵母菌一、实验目的1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理玉方法2、学习、掌握微生物的鉴定方法3、对提取的图样进行微生物的分离、纯化培养、并进行简单的形态鉴定二、实验原理1、基本思想:酵母菌常见于含糖份比较高的环境中,如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件,最适pH为4.5-6.0.酵母菌生长迅速,容易分离培养。在液体培养基中,酵母菌比霉菌生长快,利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养,然后在固
2、体培养基上划线分离纯化。2、基本路线:采样→稀释→接种→鉴定→纯化→保藏菌种三、器材和用品1、器材:小铁铲和无菌纸或袋、培养皿、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、无菌水试管、烧杯、三角瓶、电炉、玻璃棒、接种环、恒温培养箱、高温灭菌锅、移液枪(枪头)、天平、滤纸、pH试纸等。无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、显微镜、接种环等。2、试剂:a、美兰染液。b、马铃薯葡萄糖琼脂培养基:马铃薯200g(煮开10min后过滤取汁),葡萄糖20g,琼脂20g,水1000ml,pH自然。分装三角瓶;试
3、管斜面1支/组。c、乳酸马铃薯葡萄糖培养液:配方同上,不加琼脂加乳酸,按1000ml培养基加入5ml乳酸,pH为5.5左右,再分装试管9ml2支/组。四、实验方法1、采集土样带上小铁铲和无菌袋到果园土、菜园土等地采集较细碎土壤。2、样品稀释在无菌纸上称取样品5g,放入100mL无菌水的三角瓶中,手摇10分钟使土和水充分混合。用1mL无菌吸管吸取0.5mL注入4.5mL无菌水试管中稀释。3、分离在上述样品稀释液中,吸取lmL,接种灭菌了的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上,倒置于37℃温箱中培养48小时。4、加富培养:用无菌吸管取上述培养液
4、1ml,注入另装有乳酸马铃薯葡萄糖培养液中,在28-30℃培养箱中培养24h。5、镜检:用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上,中央滴一滴美兰染液,混和均匀后制成水浸片,在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式,并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞,因活细胞使美兰染液还原,故菌体不着色。6、涂皿:用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板,用无菌吸管取0.1ml加富培养液到平板中,用涂棒涂匀后培养24h。7、分离纯化:用接种环挑取单个酵母菌菌落,在平板上四区划线,培养后分离得到单个菌落。8、镜检:挑取单菌落,制片观察其形态。9
5、、菌种保藏:接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上,长出菌苔后冰箱保藏。
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