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《新型佐剂_鞭毛蛋白及其突变体的原核表达和纯化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、研究报告doi:10．3969／j．issn．1009－0002．2011．05．021新型佐剂—鞭毛蛋白及其突变体的原核表达和纯化吴晓芳1a,1b,2，李树龙2，戴红梅2，付桂明1a,1b，方宏清21．南昌大学a．食品科学与技术国家重点实验室；b．生命科学与食品工程学院，江西南昌330047；2．军事医学科学院生物工程研究所，北京100850［摘要］目的：改构鞭毛蛋白可变区，并优化目的蛋白表达与纯化参数，为评价并获得新型高效蛋白佐剂奠定基础。方法：以鼠伤寒沙门菌基因组为模板钓取2种鞭毛蛋白FljB和FliC的编码基因，分别构建FljB和FliC及其
2、对应的删除可变区的突变体BNLC和CNLC的表达载体，在大肠杆菌中诱导表达，并纯化目的蛋白。结果与结论：原初鞭毛蛋白FljB和FliC均以胞内可溶形式表达，而改造后的鞭毛蛋白BNLC和CNLC则以包涵体形式表达。通过优化纯化条件，分别建立了针对4种蛋白的纯化方法，得到无热源、纯度大于95％的目的蛋白，为进一步研究鞭毛蛋白的结构与佐剂效应的关系奠定了基础。［关键词］鞭毛蛋白；突变体；原核表达；纯化［中图分类号］Q78［文献标识码］A［文章编号］1009－0002(2011)05－0691－05ProkaryoticExpressionandPurifi
3、cationofFlagellinsandTheirMu-tantsastheNeotypeAdjuvantsWUXiao－Fang1,2,3,LIShu－Long3,DAIHong－Mei3,FUGui－Ming1,2,FANGHong－Qing31．StateKeyLaboratoryofFoodScienceandTechnology,NanchangUniversity,Nanchang330047;2．LifeScienceandFoodEngineeringCollege,NanchangUniversity,Nanchang330047
4、;3．BeijingInstituteofBiotechnology,Bei-jing100850;China［Abstract］Objective:Thisstudyfordeletingofflagellin＇scentralhypervariabledomain,optimizatingparametersoftheirprotein＇sexpressionandpurificationwascarriedout,anditshouldcontributetogainingnewandhigheffi-cientadjuvantsactivel
5、y．Methods:HavefishedthegenesoftwoflagellinsFljBandFliCfromgenomeofSalmonel-latyphimurium,weconstructedtheexpressionvectorsforFljBandFliCandtheirrelativemutantsBNLCandCNLC,whichvariableregionsweredeletedselectively,thenweinducedtheproteinsexpressininE．coli,andpuri-fiedtheseprote
6、insrespectively．Results＆Conclusion:FljBandFliCexpressedindissolubleformincells,andBNLCandCNLCexpressedwithinclusionbodies．Throughoptimizingthepurificationconditions,wesetteduppu-rificationmethodsoffourproteinsrespectively,andgettingapyrogenicproteinswhichpurityexceed95％．Itestab
7、-lishedafoundationforstudyingtherelationshipofstructureandadjuvanteffiencyofflagellinforthenextstep．［Keywords］flagellin;mutants;prokaryoticexpression;proteinpurification鞭毛蛋白是鞭毛的主要组成成分，可以通过表达于上皮细胞、单核细胞和未成熟的树突状细胞的顶端和基底外侧的TLR5受体，启动MyD88、IRAK、IKK等传递信号，最终激活NF－κB等信号路径，引发细胞因子（如TNF－α、I
8、L－8等）产生，获得宿主先天和被动免疫应答[1－3]。因此，鞭毛蛋白可被用作TLR5受体类型的疫苗佐剂，具有
