叶绿素的提取的实验方案研究

《叶绿素的提取的实验方案研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、实验叶绿体色素的提取分离一、目的通过对叶绿素的提取方法的研究，找出最方便、最简单可行的实验方法。二、材料用具及仪器药品（1）层析液配方：①石油醚20ml+丙酮2ml+苯1ml②93号汽油③9ml95%乙醇+1ml苯（2）天平、研钵、烧杯、量筒、滤纸、脱脂棉、粉笔、表面皿、剪刀、漏斗、滴管、90-95%乙醇（3）紫鸭趾草、菜心、韭菜、菠菜等叶子三、原理叶绿体含有叶绿体色素，叶绿体色素主要包括有Chla、Chlb、叶黄素和胡萝卜素，可用有机溶剂乙醇、丙酮等将它们提取出来（因为丙酮有毒，所以这里可以用酒精代替）。纸层析法是分离叶绿体色素最简单的方法。它的原理是利用混合色素中

2、各个成分物理、化学性质的差别，分别以不同程度分布于两相中（即固定相和流动相）。由于它们以不同的速度移动，从而达到分离的目的。叶绿体色素容易受光的破坏，变成褐色。叶绿体色素具有荧光现象。四、方法1、纸层析法分离叶绿体色素（方法1）（1）称取新鲜叶片（紫鸭趾草、菜心、菠菜对比效果）1克，剪碎，放在研钵中，加乙醇5m1，加入少许碳酸钙，共研磨成匀浆。（2）提取叶绿素：①用滤纸过滤。②静置匀浆5分钟，用滴管直接吸取上面的色素提取液4～5滴。③用脱脂棉过滤。（3）取一块预先干燥处理过的定性滤纸，将它剪成长约10cm，宽约1cm的滤纸条。用毛细管吸取色素提取液。在滤纸条的一端（约

3、距这一端的1cm处）划出一条滤液细线，等滤液干燥后，再重复划4～5次。（4）将滤纸条的另一端（约距这一端1cm处）拆成“V”字形，并将它挂在放有层析液的烧杯壁上（注意：色素线要略高于层析液面，且滤纸条下端最好不要碰到烧杯壁），盖上培养皿。（5）经几分钟后，观察色素带的分布，最上端为胡萝卜素，其次是叶黄素，再次是叶绿素a，最后是叶绿素b。把色素提取液一滴一滴地滴在滤纸的中央（滤纸要平放在表面皿或培养皿上）。待色素点风干后，向该色素点上慢慢滴加层析液，使四种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）在滤纸上分离出来，形成4个圆圈。四种色素在滤纸上的移动速度是胡萝卜素（橙

4、黄色）>叶黄素（黄色）>叶绿素a(蓝绿色)>叶绿素b（黄绿色）。2、纸层析法分离叶绿体色素（方法2）（1）提取色素的步骤。（同前）（2）把色素提取液一滴一滴地滴在滤纸的中央（滤纸要平放在表面皿或培养皿上）。待色素点风干后，向该色素点上慢慢滴加层析液，使四种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）在滤纸上分离出来，形成4个圆圈。四种色素在滤纸上的移动速度是胡萝卜素（橙黄色）>叶黄素（黄色）>叶绿素a(蓝绿色)>叶绿素b（黄绿色）。3、层析法分离叶绿素（方法3）（1）提取叶绿素的步骤。前同。（2）可用粉笔代替滤纸条。同样画滤液细线，等滤液干燥后，再重复划4～5次。（3

5、）将粉笔放入放有层析液的烧杯中。（注意：色素线要略高于层析液面）（4）同样的观察。五、创新点：1、研磨加入少许碳酸钙，以及用乙醇代替丙酮提取。加入少许碳酸钙的目的是为了防止在研磨过程中，叶绿素受到破坏。因为叶绿素是一种含镁的化合物，其中的镁易被H+、Cu2+、Zn2+等取代。当被H+取代后，就形成去镁叶绿素，呈黄褐色。2、过滤用了三种方法。色素分子比较大，不容易透过滤纸，滤纸有较强的吸附能力而使色素吸附在滤纸上，从而降低色素浓度,影响实验效果。因此可以把匀浆静置后直接用滴管吸取。但又考虑怕有其他杂质。又采用了脱脂棉过滤，叶绿素等色素分子是脂溶性,根据相似相溶原理,用脱

6、脂棉可减少实验过程中色素的流失,增强实验效果。3、3组层析方法的对比。可以找出最佳的层析方法。当采用滤纸条时，有好多学生对“不让滤液细线触及到层析液”这一点做的不是很好。所以后面又找到了两种方法。一种是直接用粉笔代替滤纸条，粉笔比较好固定。还有就是用圆形滤纸，把提取液点在中央，之后点层析液，这样操作也比较简单。4、层析液的改进。丙酮是有毒物质，我们可以考虑用其他物品代替。层析液主要是需要脂溶性的有机物。我们可以用常见的酒精+苯或者93号汽油。5、多种叶绿素提取材料的选择。可以通过实验选择出最易提取、提取效果最好的材料。