徐州工程学院教案

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1、徐州工程学院教案2008年至2009年第二学期第2周星期一、二、三课题名称（含教材章节）：《生物技术实验》实验1培养基的配制和灭菌技术教学目的和要求：１、了解生物技术过程中的培养技术及掌握培养基配制方法。2、掌握无菌操作技术。教学重点：生物技术过程中的培养技术培养基配制方法无菌操作技术教学难点：培养基配制方法无菌操作技术教学内容（要点）1、培养基的配制方法2、无菌操作技术徐州工程学院教案纸实验1培养基的配制和灭菌技术一、目的要求１、了解生物技术过程中的培养技术2、掌握培养基配制方法。3、掌握无菌操作技

2、术。二、实验原理1、无菌操作技术2、培养基的配制三、仪器试剂仪器：分析天平、电炉、灭菌锅试剂：蛋白胨，酵母粉，氯化钠，琼脂，NaOH，HCl四、实验操作1、LB培养基的配制细菌培养基是Luria-Bertani(LB)培养基：胰蛋白胨：10g　酵母粉：5g　氯化钠：10g　　定容至１L。　　对于固体培养基，需要加入12g琼脂加热溶解。使用5NNaOH和2NHCl调pH值到7.0。2、培养基的灭菌在120℃,下灭菌15min。灭菌时，提前将菌种保藏管和甘油一起灭菌。５组配液体培养基，５组配固体培养基。五

3、、思考题1、为什么一般的培养基要使用5NNaOH和2NHCl调pH值到7.0？答：因为一般的细菌在中性培养基中生长较好，因此需要对其pH值进行调节。2、无菌操作的要点是什么？答：一、在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区。二、执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。三、夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。四、进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂，均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。五、无菌物品必须保存在无菌包或灭菌容器内，不可暴露在空气中过久。无菌物与非无菌物应

4、分别放置。无菌包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。凡已取出的无菌物品虽未使用也不可再放回无菌窗口内。　　六、需灭菌的试剂应严格进行灭菌操作，无法高压灭菌的可采用过滤灭菌等。徐州工程学院教案2008年至2009年第二学期第３周星期一、二、三课题名称（含教材章节）：《生物技术实验》实验2菌种复壮和保藏教学目的和要求：１、了解菌种复壮的原理，掌握其基本操作步骤；2、掌握菌种保藏的原理和方法教学重点：菌种复壮的原理、基本操作步骤　　菌种保藏的原理和方法教学难点：菌种保藏的原理和方法　　　　　　　　　　教

5、学内容（要点）1、菌种复壮的原理、基本操作步骤2、菌种保藏的原理和方法徐州工程学院教案纸实验2菌种复壮和保藏一、目的要求１、了解菌种复壮的原理、掌握基本操作步骤2、掌握菌种保藏的原理和方法二、原理　　菌株长期保藏一般采用低温保藏的方法，细菌会处在休眠状态。为了更好的利用菌种资源，在大量培养前，必须进行菌种的复壮，长期保藏的菌种也要定期复壮。　　　　衰退（degeneration）：菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。　　衰退

6、的原因：①基因突变，②分离现象。常见的衰退现象：菌落和细胞形态的改变；生长速度缓慢，产孢子越来越少；抵抗力、抗不良环境能力减弱等。代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降；菌种的复壮（rejuvenation）：使衰退的菌种恢复原来优良性状。狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施；广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利

7、用自发突变（正变）不断地从生产中选种菌种的复壮措施：①纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。②通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillusthuringiensis的复壮）；③淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）。④采用有效的菌种保藏方法。防止菌种衰退的方法：①控制传代次数（一般在DNA的复制过程中，碱基的错配率是5x10-4，自发突变的频率为10-8~10-9，采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代的数）；②选择合适的培养条件；③采

8、用不同类型的细胞进行传代（对丝状微生物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种）；④采用有效的菌种保藏方法。菌种保藏：(1)目的：①存活，不丢失，不污染②防止优良性状丧失③随时为生产、科研提供优良菌种(2)原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养以及添加保护剂等）甘油低温保藏法：低温是保藏菌种的重要因素，也是常用的一种简单易行的方法。