高效液相色谱仪hplc的使用及发展

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1、《药品生产质量管理工程》学院：化学科学与工程学院专业：无机化学姓名：袁晓红学号：12014001074高效液相色谱仪（HPLC）的验收、使用及维护摘要：高效液相色谱仪在许多领域应用日益广泛，又因为它主要靠进口，价格比较昂贵，所以它的使用和维护显得十分重要。本文阐述了从购买到安装、检测高效液相色谱仪的操作步骤及高效液相色谱仪的系统组成、各部件的功能和工作原理以及在使用过程中应注意的问题，注意维护从而达到节约仪器耗材、延长仪器使用寿命的目的。关键词：高效液相色谱仪；验收；使用；维护高效液相色谱仪它是在经典液相色

2、谱的基础上，引入气相色谱的理论和技术而发展起来的。在高效液相色谱中，流动相与组分之间有一定的亲和力，分离过程的实现是组分、流动相和固定相三者间相互作用的结果，分离不但取决于组分和固定相的性质，还与流动相的性质密切相关，一般情况下，高效液相色谱仪的分析可在室温下进行，由于采用颗粒极细的固定相，柱内压降很大，加上流动相黏度高，因此必须采用高入口压，以此来维持一定的流动相线速。高效液相色谱仪对于挥发性低、热稳定性差、分子量大的物质特别有利，它在医药、生化等方面具有非常重要的作用。1.高效液相色谱仪的结构和原理高效

3、液相色谱仪主要贮液器、脱气器、高压泵、进样器、色谱柱和检测器等组成。高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论。在技术上，流动相改为高压输送：色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱；同时连接有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续精确地检测。其工作原理如下：首先储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在流动相和固定相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附一解吸的分配过程

4、，各组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而，按先后不同顺序从固定相中流出，通过检测器时，样品浓度被转换成信号传送到记录仪，数据通过以谱图等形式记录下来。2.高效液相色谱仪的验收仪器验收是一项很细致的工作。仪器验收的目的是检查外商提供的商品是否达到了它的性能指标。一台高效液相色谱仪到货后，首先要组织一个精悍的验收小组，由液相色谱专家、应用技术人员、电气技术人员和器材部门的代表组成。应准备专用的记录本、详细记载验收过程中的原始记录。整过程分数量验收、外观检查和质量验收三步。即首先俭查货物装箱单上所开列的物件与原

5、订货合同是否相符、核对无误后对主机和各零部件进行外观检查，仪器经过长途运输和装卸、难免有叩碰、如果防震、耐压的包装完善的话、是可以完好无损地到达用户手中的。若发现包装破损就要注意仪器有否受损，特别对那些精密光学部件和光源有否发生位移和破碎。仪器如无缺损、外观完好、则在仔细阅读使用说明书后即可开始质量(或性能)验收的工作。高效液相色谱仪的主要部件有高压泵、进样阀、色谱柱、检测器、记录器和梯度装置等。先进行单机检查、然后再联机测试单机检查是指脱开其他连接部件、单独对某一组件进行检查。然后对整个系统联机测试。2.

6、1高压输液泵主要检查其压力和流量能否达到规定的指标。例如，指标规定该高压泵可达最高压力500公斤/厘米2“则在泵出口处接一堵头，观察泵压是否可达500公斤/厘米2“，系统的所有接头处有否渗漏象，泵密封垫圈是否可靠地工作。目前.高压泵的流量范围一般为0.05-9.9毫升/分，须检查流量精密度和重复性。流量精密度是指在设定流量条件下与实测流量是否相符，方法是用精密量筒和停表测定单位时间的流量，一般，在最低或最高流量条件下客易偏离原设定流量。所谓重复性是指在不同情况下(如空载和不同柱压降)流量的变动。这里要注意的

7、是大多数泵的压力、流量指标分两档，即流量5毫升/分以下最高压力为500公斤/厘米2，0.05一9.9毫升/分的最高压力为250公斤/厘米2，不能要求在高流量条件下达到最高压力。2.2检测器2.22紫外吸收检测器包括单波长和可变波长两类。需要检查以下几项，①噪音和漂移将灵敏度放在最高档程，分别在静态和动态条件下(即没有或有流动相通过检测池)测定基线的噪音和漂移（图1），并同指标比较。②稳定性检测器连续工作12小时或24小时，观察基线噪音和漂移的情况。③灵敏度自检(以LDC公司1203单波长紫外检测器为例)将档

8、程(RANGE)放在0.512位置，选择开并(ZERO/CHECK)，放在CH-ECK，记录器应偏转满标的50%。换句话说，从电气线路给出0.268土0.01AU的偏转值，看记录器指示是否相应偏转满标的50%。④动态线性范围随着样品量的改变，检测器有一个线性响应的范围（图2）有的是3个数量级，有的是4个数量级。⑤波长精度测定各种可变波长检测器有不同的检查方法。例如日立200-10型分光检测器利用氖灯在656.1n