高效液相色谱仪(hplc)校正方法

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1、高效液相色谱仪（HPLC）校正方法0.1      输液系统：0.1.1   梯度误差GC不超过±3%0.1.2   泵流量设定值误差Ss＜±2%0.1.3   流量稳定性误差SR＜±2%0.2      紫外检测器性能0.2.1   基线噪声不超过5×10-4AU，基线漂移不超过5×10-3AU0.2.2   定量测量重复性误差（6次进样）RSD≤1.5%0.2.3   最小检测浓度不超过1×10-7g/ml萘/甲醇溶液0.2.4   可调波长紫外可见光检测器波长示值不超过±2nm(HP1100高效液相色谱仪可由仪器自身完成)1         校正条件

2、1.1      环境温度10-30℃，相对湿度低于65%1.2      校正设备1.2.1   秒表分度值小于0.1s1.2.2   分析天平最大称量200g,最小分度值0.1mg1.2.3   容量瓶1.2.4   微量注射器1.3      标准物质和试剂1.3.1   HPLC用甲醇、纯水，分析纯的丙酮1.3.2   1×10-4g/ml，1×10-7g/ml的萘甲醇溶液1.3.3   紫外波长标准溶液2         校正方法2.1      梯度误差GC的校正2.1.1   进行梯度洗脱程序，A溶剂为水，B溶剂为0.1%丙酮的水溶液，B经5

3、个阶段从0变到100%，20%—40%—60%—80%—100%，重复测量两次，取平均值，求各段梯度误差Gci，取最大作为仪器梯度误差，公式：Gci=（Li—Lm）/Lm×100%Li：第i段信号值的平均值；Lm：各段输出信号平均值的平均值可接受标准：-3%≤Gci≤3%2.2      泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的校正2.2.1   将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，按表一设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确的收集10-25分钟，称重，按下式计算流动相

4、流量设定值误差Ss和流动相流量稳定性误差SR。公式：Ss=（Fm-FS）/Fs100%可接受标准：-2%≤Ss≤2%SR=（Fmax-Fmin）/F×100%可接受标准：-2%≤SR≤2%Ss：流量设定值误差（%）；Fm=（W2-W1）/ρt.t：流量实测值（ml/min）W2：容量瓶+流动相的重量（g）；W1：容量瓶的重量（g）；Fs：流量设定值（ml/min）；ρt：实验室温度下流动相的密度（g/cm3）；t：收集流动相的时间（min）；SR：流量稳定性误差（%）；Fmax为同一组测量中流量最大值（ml/min）；Fmin：同一组测量中流量最小值（ml

5、/min）；F为同一组测量值的算术平均值（ml/min）表一：Ss和SR的校正流量设定值（ml/min）1.01.5测量次数33收集流动相时间（min）1510允许误差Ss2％2％SR2％2％2.3      基线噪声和漂移2.3.1   选用C18的色谱柱，以波长254nm,流动相为100%甲醇，流速1.0ml/min，仪器稳定后记录基线30min，求基线噪声Nd。可接受标准：Nd≤5×10-4AU2.3.2   基线漂移用1h内基线偏离原点的值（AU/h）表示。可接受标准：D≤5×10-3AU/h2.4      最小检测浓度2.4.1        

6、    以上述色谱条件下，进样20ul的1×10-7g/ml的萘甲醇溶液，计算最小检测浓度CL。公式：CL=2NdC×20HVNd：基线噪声，mm；C：标准溶液浓度，g/ml；H：标准溶液色谱峰的峰高，mm；V——进样体积，ul。2.4.2            可接受标准：CL≤1×10-7g/ml2.5      定量测定重复性的校正将仪器联接好，使之处于正常工作状态，波长254nm,流动相为100%甲醇，流速1.0ml/min,用萘的甲醇溶液连续进样6次记录下峰面积，按下式计算相对标准偏差：nRSD=[∑（Xi-X）2]/（n-1）×(1/X)×10

7、0%I=1RSD：相对标准偏差（%）；n：测量次数；Xi：第I次测量的峰面积X–n次进样的峰面积算术平均值可接受标准：RSD≤1.5%2.6      波长示值误差2.6.1            用注射器将紫外波长标准溶液（标准波长为235nm，257nm，313nm和350nm）从检测器入口注入样品池冲洗，并将池充满，将波长调到低于标准波长5nm处，到标准波长+4nm处，测得的最大吸收值处对应的波长与标准波长之差为波长示值误差；目前仪器可以在1ml/min的流量下，直接用空管连接检测器，每隔2min改变1nm，连续进标准样10ul，同样可得波长示值误差

8、。2.6.2   可调波长紫外可见光检测器波长示值误差(此项只适用