氯霉素elisa快速检测试剂盒

《氯霉素elisa快速检测试剂盒》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、氯霉素ELISA快速检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12037f检测范围：0.312ng/ml-10ng/ml最低检测限：0.2ng/ml特异性：本试剂盒可用于快速检测氯霉素。有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定动物组织样品（虾、鱼及肉类）、饲料、蛋、血清、血浆、尿液、蜂蜜、牛奶等样品中的氯霉素残留。说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。4

2、．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。实验原理本试剂盒采用酶联免疫间接竞争法检测氯霉素。微孔板上包被有氯霉素偶联物。加入氯霉素抗体和氯霉素标准品或样品，游离氯霉素与微量反应板上的氯霉素结合物竞争结合抗氯霉素抗体，没有结合的抗体被洗去，再向微孔中加辣根过氧化物酶标记二抗，与结合在反应板上的抗体作用一定时间，洗去多余的辣根过氧化物酶标记二抗。再向反应孔中加入相应反应底物TMB，作用一定时间后，结合的酶结合物将TMB转化为蓝色，转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的氯霉素呈负相关。

3、用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.已包被氯霉素偶联物的酶联板(Assayplate)：一块（96孔）。2.标准品（Standard）：6×250ul/瓶。3.样品稀释液(SampleDiluent)：1×20ml/瓶。4.辣根过氧化物酶标记二抗稀释液（HRP-anti-antibody Diluent）：1×20ml/瓶。5.氯霉素单克隆抗体：1×60μl/瓶（1：100）6.辣根过氧化物酶标记二抗（HRP-anti-antibody ）：1×120μl/瓶（1：100）

4、7.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。8.浓洗涤液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。9.终止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.超声清洗器5.离子交换小柱（PCX）6.氮气吹干仪7.干净的试管和Eppendof管8.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器9.蒸馏水，容量瓶等标准品：6瓶，浓度分别为10ng/ml，5ng/ml，2.

5、5ng/ml，1.25ng/ml，0.625ng/ml，0.312ng/ml。样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml。标准品S1S2S3S4S5S6浓度（ng/ml）1052.51.250.6250.312标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。氯霉素抗体和辣根过氧化物酶标记二抗的稀释原则：临用前分别以样品稀释液稀释氯霉素抗体，以二抗稀释液稀释

6、辣根过氧化物酶标记二抗，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（氯霉素抗体每孔50ul，辣根过氧化物酶标记二抗每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul氯霉素抗体和辣根过氧化物酶标记二抗加990ul样品稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。操作步骤实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。1.酶联板使用前用洗液洗板2-3次，每次浸泡1-2分钟，25

7、0ul/每孔，甩干。2.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔从高到低分别加标准品或待测样品50ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，然后在所有孔中加入50ul氯霉素抗体工作液。尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜，37℃反应30分钟（为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液）。3.温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，250ul/每孔，甩干。1.所有孔中加入100ul辣根过氧化物酶标记二抗工作液。尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。酶标板

8、加上盖或覆膜，37℃反应30分钟。2.温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，250ul/每孔，甩干。3.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，一般10-15分钟内，此时肉眼可见标准品的后3-4孔有明显的梯度蓝色，前3-4孔颜色不明显，即可终止）。4.依序每孔加终止溶