资源描述：
《selectin（sl-selectin）在杆状病毒载体系统中的表达与纯化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、selectin（sL-selectin）在杆状病毒载体系统中的表达与纯化复里亏Un报iv医学版2..6Sep,33FudanUnivJMedSc(5)i…647人的可溶性L—selectin(sL—selectin)在杆状病毒载体系统中的表达与纯化胡萍石必枝吴兴中(复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系一卫生部糖复合物重点实验室上海200032)【摘要】目的利用昆虫细胞杆状病毒系统表达人的重组可溶性L一型选择蛋白配体凝集素(humanrecombi—nantsolubleL—selectin:sL—select
2、in),探索在真核细胞中高效表达人的重组可溶性L一型选择蛋白配体凝集素的新途径.方法将已经重组好的杆状病毒感染昆虫细胞,表达sL一选凝素于细胞培养上清,利用末端连接的ZZ-结构域(蛋白A来源的首尾相连的二聚化z结构域)与IgG-琼脂糖一6的结合而分离纯化,通过SDS-PAGE鉴定分子量的大小,并用特异性抗体验证,另外通过重组的sL一选凝素与SMMC7721的黏附观察其活性.结果sL_选凝索可在昆虫细胞中表达,产物的分子量约为46000,与人肝癌细胞SMMC7721的结合率可达7O.结论sL一选凝素可通过杆状病毒载体
3、在昆虫细胞中有效表达,分离纯化后依然保持生理活性.【关键词】L,型选择蛋白配体凝集素;杆状病毒;ZZ一结构域【中图分类号】Q503【文献标识码】AExpressionandpurificationofhumanrecombinantsolubleL-selectin(sL-selectin)bybaculovirusexpressionsystemHUPing,SHIBi—zhi,WUXing—zhongA(KeyLaboratoryofGlycoproteins,MinistryofPublicHealth—De
4、partmentofBiochemistryandMolecularBiology,ShanghaiMecicalCollege,FudanUniversity,Shanghai200032,China)[Abstract]PurposeToexpressrecombinanthumansL—selectinininsectcelllineviabaculovirusex—pressionsystemandthustoexplorenewwayofexpressthisproteinineukaryoticsyst
5、emwithhighef—ficiency.MethodsInsectcellsSf9wereinfectedwithrecombinantbaculoviruscontainingsL—selectinwhichwerethenproducedandsecretedtosupernatant.ThepurificationwereperformedbybindingofsL—selectinZZ—tag(head—to-taildimerizedZdomainderivedfromproteinA)toIgG-S
6、epharose.ThesizeofsL—selectinwereidentifiedbySDS-PAGEandtheproteinconfirmedwithspecificantibody,thebio—logicalactivitywasmeasuredbycelladhesionassay.ResultsTheconcentratedrecombinantsL—se—lectinranatsizeof46000onSDS-PAGEcomparedwithmarkerandapproximately70SMMC
7、7721adheredtoplatescoatedwithrecombinantsL_selectin.ConclusionsThesL_selectinwithbiologicalactivitycanbeefficientlyexpressedbybaculovirusexpressionsystem.[Keywords]sL-selectin;baculovirus;ZZ-tag选择蛋白配体凝集素(selectin)是重要的细胞黏附分子之一,包括L一选凝素(白细胞选凝素),P一选凝素(血小板选凝素)和E一选凝
8、素(内皮细胞选凝素)三种,均参与机体很多重要的生理过程n].其中,L一选凝素主要在淋巴细胞表面表达,可通过血液中的淋巴细胞和淋巴结中的高内皮静脉(HEV)上国家自然科学基金项目(30570414,30470398)资助△通讯作者Tel:021—54237697;E—mail:xz—wu@shmu.edu.ca的受体相识别黏着介导淋巴细胞的归巢,以及通过血液中
