乳杆菌生理生化实验

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1、形态学鉴定1唯一碳源利用(编码特征1-19)1过氧化氢酶试验(编码特征20)1氧化酶试验(编码特征21)2石蕊牛乳试验(编码特征22-27)20.1％美兰牛乳试验(编码特征28．29)2耐酸碱试验(编码特征30-35)2生长温度范围试验(编码特征36-41)2耐盐性测定(编码特征42-47)2硝酸盐还原反应(编码特征48)2七叶苷水解(编码特征49)3联苯胺反应试验(编码特征50)3柠檬酸盐利用试验(编码特征51)3葡聚糖产生试验(编码特征52)3吲哚产生试验(编码特征53)3硫化氢产生(编码特征54)3明

2、胶液化试验(编码特征55)3V_P反应(编码特征56)3甲基红(编码特征57)3苯丙氨酸脱氨酶测定(编码特征58)4纤维素分解试验(编码特征59)4脲酶测定(编码特征60)·4精氨酸产氨试验(编码特征61)4精氨酸水解试验(编码特征62)4丙二酸利用试验(编码特征63)4药敏试验(编码特征65．72)4全部接种菌株均为MRS液体培养基中培养24h的菌株。形态学鉴定将分离纯化的菌种分别涂到MRS固体培养基，30℃培养24h，观察菌落特征，取典型菌落涂片，并进行革兰氏染色，芽孢染色，鞭毛染色，油镜下观察菌体形态

3、，拍照。唯一碳源利用(编码特征1-19)试验中以甘露醇、D-海藻糖、D．山梨醇、木糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖，葡萄糖、葡萄糖酸钠、棉籽糖、纤维二糖、D．阿拉伯糖、D．核糖、鼠李糖、淀粉、甘油，肌醇、马尿酸钠等18种含碳化合物作为唯一碳源，根据要求不同在PY基础培养液中浓度分别为1％和0．5％。结果用BTB-MR指示剂检测(凌代文，东秀珠，1999)。葡萄糖发酵同时检测产酸产气的情况(M．J．佩尔扎，R．D．里德，E．C．S．詹，1984)。过氧化氢酶试验(编码特征20)将供试菌株接种于MRS培养液中，37℃培养

4、18h，用接种环挑取一环涂于干净的载玻片上，放置约20min后，在其上加一滴3％的H202，若有气泡产生则为阳性反应，无气泡为阴性反应(凌代文，东秀珠，1999)。氧化酶试验(编码特征21)用l％四甲基对苯二胺盐酸浸湿新华滤纸，置于培养皿中，然后用灭菌竹签挑取供试菌在滤纸上划线，10s内若划线部分变为紫色者为阳性反应，不变色者为阴性(东秀珠，蔡妙英，2001)。石蕊牛乳试验(编码特征22-27)将2．5％的石蕊水溶液与脱脂乳按4：100(v／v)的比例混合，使牛乳呈丁香花紫色；分装试管，110"C灭菌20m

5、in。接种供试菌，37"(2培养，持续观察14d，记录结果(东秀珠，蔡妙英，2001；赵斌，何绍江，2002)．细菌对牛奶的作用有以下几种情况：(1)产酸一细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红。(2)产碱——细菌分解酪蛋白产生碱性物质，使石蕊变蓝。(3)胨化——细菌产生蛋白酶，使酪蛋白分解，故牛奶交得比较澄清。(4)酸凝固——细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红，酸度很高时，可使牛奶凝固。(5)凝乳酶凝固——有些细菌能产生凝乳酶，使牛奶中的酪蛋白凝固，此时石蕊常呈蓝色或不变色。(6)还原——细菌生长旺盛，使培养基氧化还原电

6、位降低，因而石蕊还原褪色。0.1％美兰牛乳试验(编码特征28．29)将脱脂乳分装试管，110℃灭菌20min。接种供试菌，37℃培养3天后加入l滴O．1％的美蓝溶液，蓝色褪去者为美蓝还原阳性，蓝色不褪去者为阴性(张丽萍，艾玉琴，杨焕民，1995；沈萍，范秀容，1999)。耐酸碱试验(编码特征30-35)本试验测定了供试菌株对酸碱的耐受性。先将MRS液体培养基灭菌后用无菌HCI和NaOH将培养基的pH调至pH3．0、pH4．0，pH4．5、pH8．0、pH9．2、pH9．6，以pH6．4的液体做阳性对照。接种

7、、培养、观察和记录结果，与阳性对照同样浑浊的记为阳性，否则为阴性(凌代文，东秀珠，1999)。同时生长温度范围试验(编码特征36-41)选择10℃、15℃、18℃、45℃、50℃、60"C(30min)等6种不同温度范围的反应，MRS液体培养基培养，结果用接种菌株于37"C培养为阳性对照，每隔2h测定其吸光值(OD600)。(凌代文，东秀珠，1999)。耐盐性测定(编码特征42-47)在3%、4%、6．5%、8%、12%、15%等6种不同NaCI浓度范围的反应在MRS液体培养基培养，结果以不含NaCI的MR

8、s液体培养基作对照(凌代文，东秀珠，1999)。硝酸盐还原反应(编码特征48)将硝酸盐还原液体培养基分装试管，8mL／管，37"C培养48h，另保留一支不接种硝酸盐培养基作为对照．检查方法如下：在比色皿中，加入一滴菌液，再加Griess试剂A、B液各一滴，如出现橙色或红色为硝酸盐还原阳性；如无橙色或红色出现，则再加一滴二苯胺试剂进一步检查，若呈现蓝色反应，则为阴性结果，不呈现蓝色，则为阳性结果(赵斌，何绍江，20