植物生理生化实验

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1、实验一植物组织游离氨基酸含量测定一茚三酮试剂显色法P199原理：游离氨基酸与茆三酮共热吋能定景牛.成二酮茚-二酮茚胺，产物呈蓝紫色，称Rubemans紫。其吸收峰在570nm,且在-定范围P、j吸光度与游离氨基酸浓度成正比，因此可用分光光度法测定其含M。①微酸、90°C：氨基酸被氧化形成C02、NH3和醋，茚三酮被还原成还原型茚三酮。②脱水：还原型茚三酮与另一分子茚三酮和一分子氨进行缩合脱水，生成二酮茚-二酮茆胺。材料：清水浸种吸涨的水稻、清水浸种萌发W天的水稻。实验步骤:分別収lg萌发、米萌发水稻于研钵中，

2、加入5ml醋酸（使蛋白质变性，沉淀），研磨成匀浆后，用无氨蒸馏水稀释至100ml。用干燥滤纸过滤到三角瓶中。如下操作试管编兮空白1样品1（未萌发）样品2（萌发）试剂2345样品提取液ml02222无氨蒸馏水ml2.000000.1抗坏血酸ml0.10.10.10.10.1水合弗三酮ml3333357()nmOD位00.1300.1230.1880.168每管含氮量01.261.191.831.83置于沸水中加热15min,取出用冷水迅速冷却并不吋摇动，使之呈蓝紫色，用60%乙醇定容20ml,在570nm波长下

3、测定吸光度。样品氨基态含氮景（ug/100g鲜重）=CVT/VsW*100；C=A/k（k=0.103）；Vt=100/2:Vs=l:W=1注意事项：1.测定前所用的玻璃仪器要千燥，所用的蒸馏水必须为无氨水；2.样品要磨匀，川无氨蒸馏水定各，并川丁•燥滤纸过滤；3.抗坏血酸易被还原；加入的景要严格控制，因为还原剂抗坏血酸会与茚三酮反应；4.水浴锅的液面要高于试管内的液面，使其加热均匀，并在加热后儿秒再塞上塞子，水浴锅温度要高于90°C,15min后取出迅速冷却,再加入60%乙醇；5.稀释后要迅速比色；6.谷物

4、等缶白质样品可川酸水解法讲蛋G质水解后，川本法测定氨基酸含景，可计算出样品蛋G质含量；7.反应要在无水、有机、微酸的环境下进行。最适PH为4.5,是乙醇-乙酸钠缓冲液和醋酸缓和后的PH。思考题：1.茚三酮与所有氨基酸的反应产物都相同吗？为什么？不相同，因为有些氨基酸的结构不同，不含游离的氨基，如脯氨酸。2.测定植物组织屮游离氨基酸总景有何意义？可以测定梢物对氮的根吸收，测定梢物的病理和逆境状态和梢物的营养、施肥指标等。3.植物飢织氨基酸的测定为什么要除去饭0质？川10%乙酸出去缶Q质的原理足什么？因为植物组织

5、中除了游离氨基酸外还有蛋a质，蛋a质会影响实验结果。10%乙酸会使蛋白质变性产生沉淀而被过滤除去。4.抗坏血酸在测定中的作用是什么？作川是保护还原型茚三酮，防治其被氧化。722S型分光光度计使用：①空白，开启，透射比0%,关上，wo%。②吸光度模式实验二植物组织可溶性蛋白质含量测定一Folin酚试剂法P188原理：Folin酚试剂法，结合了双缩脲试剂和酚试剂与蛋白质的反应。①碱性：蛋白质肽键与铜生成紫红色蛋白质-铜络合物。②络合物和蛋0质中氨基酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸的残基使Folin试剂(磷钼酸-磷钨酸试

6、剂)还原,产生磷钔蓝和磷钨蓝的深蓝色混合物质。在一定条件下，颜色深浅与逍内质含贤成正相关，吸收峰在650nm，因此可用分光光度法测定含朵。材料：清水浸种吸涨的水稻、清水浸种萌发两天的水稻。实验步骤：分别取().5g萌发、未萌发水稻于研钵屮+2ml蒸馏水+石英砂，充分研磨，+3ml蒸馏水，定界25ml,放置15min,过滤取上清液备用。如下揀作编号123456未萌发前发牛血清蛋白250ug/ml00.20.40.60.81.0酶0.5酶0.5蒸溜水ml1.00.80.60.40.200.50.5试剂甲ml5摇么

7、室温下放置lOmin试剂乙ml0.5迅速摇匀-r室温放S30min650nmOD值0.0000.1120.1540.2550.4740.5510.1670.237蛋白质含量05010015020025071.8104.8样品蛋白质含量（mg/g鲜重）=XVtN/WVs*1000；VT=25；W=0.5；Vs=0.5注意事项：1.Folin酚试剂只有在酸性条件卜冰稳定；2.试剂甲、试剂乙加入后耑要迅速摇匀；3.反应最适温度在25-30°C;4.样品中若含冇酚类、拧檬酸和巯某类化合物均会产生干扰。思考题：1.请介

8、绍儿种常川的可溶性®白质测定方法，并比较其优缺点。①Folin-酚试剂法优点:灵敏度大、操作简单缺点：试剂难配置，易受柠檬酸等化合物千扰②考马斯亮蓝G-250法优点:乂敏度大、操作简单缺点：易造成二次污染③紫外分光光度法优点：节约样品、操作简单缺点：准确度差2.测定植物体可溶性缶白含量有什么意义和川途？试举例说明。可以测定植物的代谢水平、食品屮的营养指标。3.Folin-盼试剂法测定可溶性蛋白的原理