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1、猪细小病毒分子生物学诊断技术的研究进展芜湖职业技术学院2010年第12卷第4期猪细小病毒分子生物学诊断技术的研究进展季慕寅(芜湖职业技术学院生物系,安徽芜湖,241000)摘要:猪细小病毒是引起母猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一.它广泛分布于世界各地,给我国乃至全世界的养猪业造成了巨大的经济损失.近年来,猪细小病毒的分子生物学诊断方法的研究进展迅速,为猪细小病毒的快速,准确的诊断起到了重要的作用.从聚合酶链式反应技术,核酸探针技术,DNA芯片技术等方面对猪细小病毒的分子生物学诊断技术进行综述有助于我们进一步了解这项技术关键词:猪细小病毒;分子生物学诊断;聚合酶链式反应;核酸探针技术;DNA
2、芯片技术.中图分类号:$852.6;文献标识码:A;文章编号:1009.1114(2010)04.0027.03CurrentsituationofMolecularBiologyDiagnosisforPorcineParvovirusJIMu-yinAbstract:Porcineparvovirus(PPV)isoneofmajorcausativeagentswhichresultsinasyndromeofreproductivefailureinswine.Itsinfectionhasbecomeaworld—wideproblemandcausesagreateconom
3、iclossinpig—breedingindustryinChina.Atpresent,withtherapiddevelopment,molecularbiologydiagnosishasbeenwidelyusedandplayedanimportantroleinthediagnosisofPPV.TosummarizethemolecularbiologydiagnosistechnologyforPPVfromPolymerasechainreactiontechnology,nucleicacidprobetechnologyandgenechiptechnologyi
4、shelpfultofurtherourcomprehensionforit.Keywords:porcineparvovirus(PPV);molecularbiologydiagnosis;polymerasechainreaction(PCR);nucleicacidprobe;genechip.收稿日期:2010.09.20作者简介:季慕寅,1974年出生,安徽无为人,南京农业大学预防兽医学专业学位研究生,讲师.猪细小病毒(porcineparvovirus,PPV)是细小病毒科细小病毒属成员,是一种自主复制型病毒.它的感染主要引起母猪繁殖障碍,尤其是初产母猪和血清学阴性的经产母
5、猪的胚胎和胎儿的感染和死亡,导致母猪流产,不孕,产死胎,畸形胎,木乃伊胎及弱仔等.该病在世界范围内广泛分布并在大多数猪场呈现地方性流行得趋势,给养猪业带来了巨大的经济损失.此外,有学者指出,PPV和猪圆环病毒2型(porcinecircovirustype2,PCV2)协同感染是导致断奶仔猪多系统衰竭征(PostweaningMultisystemicWastingSyndrome,,PMWS)的主要原因.因此,对PPV进行快速,准确的诊断有着重要的临床意义.目前,常用的PPV诊断方法有病毒学检测,血凝试验(HA)和荧光抗体技术.这些技术特异性不强,敏感性业较低.近几年来,随着分子生物学
6、的飞速发展,快速,高敏感性和特异性的分子生物学诊断技术在PPV诊断中得到了充分的发展.以下从PCR检测技术,核酸探针技术,DNA芯片技术等方面对PPV的分子生物学诊断技术进行了综述.1.聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)技术1.1.常规PCR自1985年Mullis发明PCR技术以来,PCR作为一种快速,高效,敏感性高,特异性强的技术已经被广泛地运用于27病原微生物的诊断.此法率先运用PCR技术检测了PPV.根据2株PPV经典分离株NADL一8和NADL.2的DNA序列,科研人员设计了一对针对结构基因VP2的引物,扩增出158bp的核酸片段.该方法敏
7、感性可达到1PFU的细胞感染量,并且在伪狂犬病毒(pseudorabiesvirus,PRV),犬细小病毒(canineparvovirus)等中未出现特异性条带,说明其具有较高的敏感性和特异性.参照上述方法人们利用相同的引物,成功地建立PPVPCR检测方法,并将其运用于临床.在对26份临床采集的自然感染猪样品中,PPVPCR方法的阳性检出率最高,其敏感性依次高于HAT,间接斑点ELISA,双夹心ELISA和免疫金银染色法(IGSS
